細胞膜紅色熒光染料 DiD

 

Cat number：KFS152

Store at -20℃ for 12 months ，避光

For Research Use only

 

一、產品描述

 

長鏈二烷基羰花青化合物，特別是 Dil，廣泛應用于固定和非固定的組織與細胞中，進行順行或逆行的神經示蹤分析。Dil 不會影響細胞的活力、生長以及基本生理特性。

 

Dil 標記運動神經元，可在培養基條件下持續跟蹤長達四周，在體內長達一年。染料通過在質膜中的緩慢橫向擴散均勻標記神經元，0.2~0.6mm/每天/固定標本，在活體組織里，可以達到 6mm/每天。經過醛固定的組織，Dil 的擴增可以持續長達 1~2 年。一般情況下未標記的染料不會向非標記的細胞轉移，除非質膜被破壞，比如切片部位。DiD(MW:959.91)

 

光譜特性

 

 

 

 

 

 

 

 

DiO, DiI, DiD, and DiR 結合磷脂雙分子層的標準發射光譜圖。

 

二、產品包裝

 

組份	KFS152	儲存條件
細胞膜紅色熒光染料 DiD（100mM in DMSO）	10mg，110μL	-20℃，避光

 

三、操作說明

 

制備儲液

高濃度儲液染料以DMSO溶解配制為1mM儲液。一旦制成的儲液，需避光冷凍，儲液可保存6個月。

 

標記懸浮細胞

1.1 以無血清培養基懸浮細胞密度為 1X10⁶ 個/mL。

1.2 每 1mL 細胞懸液加入 5μL 細胞標記液，混勻。

1.3 37 度孵育 1~20 分鐘。不同的細胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時間可選擇 

20 分鐘，隨后再進行優化。

1.4 37 度，1500rpm 5 分鐘離心標記懸浮液。

1.5 去上清，用 37 度的培養基輕輕懸浮細胞。

1.6 重復兩次以上的洗滌步驟。

1.7 放置 10 分鐘后進行熒光測量。

 

標記貼壁細胞

2.1 培養細胞至所需的匯合度。

2.2 取出爬片，吸去培養基，放到蓋玻片濕盒中。

2.3 準備標記，每 1mL 新鮮培養基中加入 5μL 的標記液。

2.4 吸取 100μL 蓋玻片周圍的染色介質，輕輕鋪勻，使之蓋滿整個爬片。

2.5 37 度孵育細胞，不同的細胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時間可選擇 20 分

鐘，隨后再進行優化。

2.6 去掉染色介質，用新鮮預熱的培養基孵育 10 分鐘，再更換以新的預熱的培養基孵育 10 分鐘，重

復洗滌蓋玻片三次。

 

 

Cell Line	Optimal incubation time
Jurkat	2 minutes
HeLa	8 minutes
P3X	15 minutes
3T3	15 minutes

表1. 優化的細胞染色孵育時間

 

Tracer	Ex	Em	Optical Filters
	（nm）	（nm）	Omega	Chroma
DiO	484	501	XF23	31001
DiI	549	565	XF32	31002
DiD	644	665	XF47	31023
DiR	750	780	XF112	41009

 

表2.DiO, DiI, DiD and DiR 光譜特性