細(xì)胞膜橙色熒光染料 Dil
Cat number：KFS151
Store at -20℃ for 12 months，避光
For Research Use o
一、 產(chǎn)品描述
長鏈二烷基羰花青化合物，特別是 Dil（MW：933.88），廣泛應(yīng)用于固定和非固定的組織與細(xì)胞中，進(jìn)行順行或逆行的神經(jīng)示蹤分析。
Dil 不會影響細(xì)胞的活力、生長以及基本生理特性。Dil 標(biāo)記運(yùn)動神經(jīng)元，可在培養(yǎng)基條件下持續(xù)跟蹤長達(dá)四周，在體內(nèi)長達(dá)一年。染料通過在質(zhì)膜中的緩慢橫向擴(kuò)散均勻標(biāo)記神經(jīng)元，0.2~0.6mm/每天/固定標(biāo)本，在活體組織里，可以達(dá)到 6mm/每天。經(jīng)過醛固定的組織，Dil 的擴(kuò)增可以持續(xù)長達(dá) 1~2 年。一般情況下未標(biāo)記的染料不會向非標(biāo)記的細(xì)胞轉(zhuǎn)移，除非質(zhì)膜被破壞，比如切片部位。
光譜特性
iO, DiI, DiD, and DiR 結(jié)合磷脂雙分子層的標(biāo)準(zhǔn)發(fā)射光譜圖。
二、產(chǎn)品包裝
|
組份 |
KFS151 |
儲存條件 |
|
細(xì)胞膜橙色熒光染料 Dil |
10mg |
-20℃，避光 |
三、操作說明
制備儲液
固體染料以 DMF 或者 DMSO 或乙醇溶解配制為 1mM 的儲液。一旦制成的儲液，需避光冷凍，儲液形式可保存 6 個月。
標(biāo)記懸浮細(xì)胞
1.1 以無血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞密度為 1X106 個/mL。
1.2 每 1mL 細(xì)胞懸液加入 5μL 細(xì)胞標(biāo)記液，混勻。
1.3 37 度孵育 1~20 分鐘。不同的細(xì)胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時間可選擇 20
分鐘，隨后再進(jìn)行優(yōu)化。
1.4 37 度，1500rpm 5 分鐘離心標(biāo)記懸浮液。
1.5 去上清，用 37 度的培養(yǎng)基輕輕懸浮細(xì)胞。
1.6 重復(fù)兩次以上的洗滌步驟。
1.7 放置 10 分鐘后進(jìn)行熒光測量。
標(biāo)記貼壁細(xì)胞
2.1 培養(yǎng)細(xì)胞至所需的匯合度。
2.2 取出爬片，吸去培養(yǎng)基，放到蓋玻片濕盒中。
2.3 準(zhǔn)備標(biāo)記，每 1mL 新鮮培養(yǎng)基中加入 5μL 的標(biāo)記液。
2.4 吸取 100μL 蓋玻片周圍的染色介質(zhì)，輕輕鋪勻，使之蓋滿整個爬片。
2.5 37 度孵育細(xì)胞，不同的細(xì)胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時間可選擇 20 分鐘，
隨后再進(jìn)行優(yōu)化。
2.6 去掉染色介質(zhì)，用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)基孵育 10 分鐘，再更換以新的預(yù)熱的培養(yǎng)基孵育 10 分鐘，重復(fù)洗
滌蓋玻片三次。
|
Cell Line |
Optimal incubation time |
|
Jurkat |
2 minutes |
|
HeLa |
8 minutes |
|
P3X |
15 minutes |
|
3T3 |
15 minutes |
表1.優(yōu)化的細(xì)胞染色孵育時間
|
Tracer |
Ex |
Em |
Optical Filters |
|
|
|
(nm) |
(nm) |
Omega |
Chroma |
|
DiO |
484 |
501 |
XF23 |
31001 |
|
DiI |
549 |
565 |
XF32 |
31002 |
|
DiD |
644 |
665 |
XF47 |
31023 |
|
DiR |
750 |
780 |
XF112 |
41009 |
DiO, DiI, DiD and DiR 光譜特性
