內(nèi)質(zhì)網(wǎng)綠色熒光探針 ER-Green[DiOC6(3)]

Cat number：KFS123

Store at -20℃ for 12 months，避光

For Research Use only

一、產(chǎn)品描述

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)綠色熒光探針 DiOC6(3)，是一種膜可透性，綠色熒光，低濃度下可選擇性染色活細胞的線粒體的親脂性染料。高濃度下，也可以用于染色其他細胞器內(nèi)膜，如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。DiOC6(3) （ex,480 nm; em,>520nm）。

二、產(chǎn)品包裝

三、輔助說明

化學(xué)名稱：DiOC6(3)

分子式：C29H37IN2O2

分子量：572.5

CAS 號碼：53213-82-4

四、操作說明

制備 ER-Green 儲液：10mg ER-Green 以無水 DMSO 制備成 1mM 的 ER 儲液，-20℃避光保存。

 1. ER-Green 工作液的配制：

a. 取少量 ER-Green，以 HBSS 或不含酚紅血清的合適培養(yǎng)基，按照 1:1000 比例進行稀釋。

b. ER-Green 工作液使用前需 37℃預(yù)溫育。

注：工作液中 ER-Green 的濃度可以根據(jù)實際情況進行適當(dāng)調(diào)整，推薦的稀釋比例調(diào)整范圍為

1:1000-1:3000。為降低背景，在染色效果可以接受的范圍內(nèi)，建議盡量使用較低濃度的 ER- Red。

2. 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的熒光標(biāo)記：

a. 去除細胞培養(yǎng)液，用適量的溶液如 HBSS with Ca2+ & Mg2+ (Hanks’ Balanced Salt Solution with Ca2+ & Mg2+)洗滌生長在蓋玻片上的細胞。 對于懸浮細胞的染色可以參考貼壁細胞的染色方法進行。

b. 去除洗滌液，加入步驟 1 配制好的并 37℃預(yù)溫育的 ER-Green 染色工作液，與細胞 37℃共孵育 15-30 分鐘。

c. 去除 ER- Green 染色工作液，用細胞培養(yǎng)液洗滌細胞 1-2 次。

d. 隨后通常用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈明亮的強熒光染色。

e. 如需固定，可以使用 4%甲醛 37℃固定 2 分鐘。固定后用適當(dāng)?shù)南礈煲合礈?2-3 次，每次 5 分鐘，隨 

后可以進行復(fù)染或滴加適當(dāng)?shù)目篃晒獯銣绶馄海蠓馄^察。注意：ER-Green 染色的細胞不能用 Triton X-100 通透，Triton X-100 通透處理會導(dǎo)致ER-Green 的熒光染色消失。

五、注意事項

1． 儲液 ER-Green (1mM)在 4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)， 可 20-

25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。對于微量的液體，每次使用前先離心數(shù)秒鐘，使液體充分沉降到管底。

2．熒光染料可能發(fā)生淬滅，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

3．需自備蓋玻片和載玻片。

4．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。