試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠緊密連接蛋白1（ZO-1）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠緊密連接蛋白1（ZO-1）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。