產品編號：KFS025

儲存條件：2-8℃，避光，有效期 6 個月

For Research Use Only

一、試劑盒說明

本試劑盒可用于免疫熒光方法以顯示人、大、小鼠來源的組織樣本cTnI抗原分布。本試劑盒適用于常規福爾馬林固定石蠟包埋切片、冰凍切片、培養固定的細胞爬片等。

二、試劑盒組份

備注：抗體在 2-8℃可以保存 6 個月，長期保存可以分裝保存于-20℃。

三、試劑盒以外自備試劑和儀器

二甲苯、乙醇、蒸餾水或去離子水、甲醇、10%山羊血清封閉液、10 mM PBS（pH 7.4）、免疫組化筆、熒光防淬滅封片膠、顯微鏡。

四、使用注意事項

1. 檢測標本時需同時做陰性對照和陽性對照。

2. 在超過有效期的試劑盒中一種或多種試劑的活性可能降低，因此不得使用過期的試劑盒，不同批號間試劑盒也不能交叉混用。

五、推薦操作方法（以石蠟切片為例）

1. 石蠟切片二甲苯脫蠟、梯度酒精水化，用PBS(pH7.4)沖洗三次，每次3分鐘（3×3min）。

（注意：從此步驟起，嚴禁標本或組織切片干燥）。

2. 抗原修復（選做步驟：石蠟組織切片建議進行蛋白酶K修復20ug/ml，37℃，30min）。

3. 除去PBS液，每片加50~100μl的10%山羊血清封閉液（自備），濕盒內室溫或37度孵育

30分鐘。PBS洗滌3× 2min。

4. 除去PBS液，每張切片加50~100μl的cTnI兔多抗(用戶根據實驗需要進行自選，用量體積按完全覆蓋組織為準，建議抗體稀釋比例為：固定細胞1:100-500；冰凍切片1:100-500；石蠟切片1:50-200)，濕盒內室溫（或37度）孵育60分鐘或4℃過夜。PBS洗滌3×2min。

5. 除去PBS液，每張切片加50~100μl熒光標記二抗工作液（體積用量按完全覆蓋組織為準，

FITC標記羊抗兔IgG，PBS稀釋抗體1:50~1:200）。PBS洗滌3×2min。

6. 除去PBS液，以甲醇稀釋20×DAPI溶液至1×，每片加50~100μl避光染色10~15min。

7. PBS洗滌2次，以甘油明膠（60%甘油-PBS）或者防淬滅封片膠封片，在熒光顯微鏡下觀察拍照。

六、可能出現的問題及解決辦法

1. 脫蠟不徹底，容易出現非特異性背景染色，建議免疫組化切片脫蠟與常規HE脫蠟分開。

2. 操作過程中沖洗不充分，容易出現非特異性背景染色，需嚴格控制沖洗時間與次數。

3. 為防止可能出現的假陽性、假陰性結果，建議在實驗過程設置陽性與陰性對照。

4. 操作中滴加試劑時緩沖液PBS未瀝干致使試劑稀釋，將引起染色強度變弱或假陰性發生。因此，每步滴加試劑前應將組織片上的PBS液除干，但又必須預防干片。