產品編號：KFS024
儲存條件：2-8℃ 保存，有效期 6 個月
For Research Use Only
一、試劑盒說明
本試劑盒可用于免疫組織化學方法以顯示人、大、小鼠來源的組織樣本cTnI抗原分布。本試劑盒適用于常規福爾馬林固定石蠟包埋切片、冰凍切片、培養固定的細胞涂片等。即用型一步法免疫組化檢測試劑盒與常規免疫組化染色試劑盒相比，具有高靈敏性、高特異性及操作簡便的優點。多個HRP聚合物直接與二抗相連，大大放大了抗原抗體結合的信號，減少了孵育步驟，孵育時間縮短為10分鐘。試劑盒不含有生物素，完全避免了內源性生物素造成的背景影響。試劑盒提供的DAB顯色試劑為增強型顯色試劑，且自帶稀釋液，避免了由于水質的不同對DAB顯色造成的影響；與一般DAB試劑相比，增強型的穩定性顯著提高，顯色更醒目，敏感性更高。
二、試劑盒組份
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組份 |
KFS024（50 tests） |
儲存條件 |
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cTnI 兔多抗 |
50 μl |
2-8℃/-20℃ |
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增強劑 |
3 ml |
2-8℃ |
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HRP 聚合物 (即用型) |
3 ml |
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試劑 A：20×DAB 底物緩沖液 A |
160 μl |
2-8℃，避光 |
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試劑 B：20×DAB 底物緩沖液 B |
160 μl |
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試劑 C：20×DAB 底物緩沖液 C |
160 μl |
備注：抗體在 2-8℃可以保存 6 個月，長期保存可以分裝保存于-20℃。
三、試劑盒以外自備試劑和儀器
二甲苯、乙醇、蒸餾水或去離子水、3%H2O2-甲醇、10%山羊血清封閉液、10 mM PBS（pH 7.4）、免疫組化筆、蘇木素染液、封片膠、顯微鏡。
四、使用注意事項
1. 檢測標本時需同時做陰性對照和陽性對照。
2. 增強劑中含有 0.1% ProClin 300 防腐劑，使用時請注意自我防護。
3. DAB 顯色液需現用現配，避光放置，且在 2 小時內染色。
4. 在超過有效期的試劑盒中一種或多種試劑的活性可能降低，因此不得使用過期的試劑盒，不同批號間試劑盒也不能交叉混用。
五、推薦操作方法（以石蠟切片為例）
1. 石蠟切片二甲苯脫蠟、梯度酒精水化，用PBS(pH7.4)沖洗三次，每次3分鐘（3x3min）。
（注意：從此步驟起，嚴禁標本或組織切片干燥）。
2. 抗原修復（選做步驟：石蠟組織切片建議進行蛋白酶K修復20ug/ml，37℃，30min）。
3. 如有必要，每張切片加50μl雙氧水-甲醇封閉液（需完全覆蓋組織），室溫下孵育5分鐘，以
阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌3×2min。
4. 除去PBS液，每片加50~100μl的10%山羊血清封閉液（自備），濕盒內室溫或37度孵育30分鐘。PBS洗滌3×2min。
5. 除去PBS液，每張切片加50~100μl的cTnI兔多抗(用戶根據實驗需要進行自選，用量體積按
完全覆蓋組織為準，建議抗體稀釋比例為：固定細胞1:100-500；冰凍切片1:100-500；石蠟切片1:50-200)，濕盒內室溫（或37度）孵育60分鐘或4℃過夜。PBS洗滌3×2min。
6. 除去PBS液，每張切片加50μl增強劑（需完全覆蓋組織），室溫下（或37度濕盒）孵育30分鐘。PBS洗滌3×2min。
7. 除去PBS液，每片加50μl HRP聚合物（需完全覆蓋組織），室溫下（或37度濕盒）孵育30分鐘。PBS洗滌3×2min。
8. 制備DAB顯色液（需現用現配；可根據需要一次染多張切片），以染十張切片為例：取25μl試劑A加入到425μl超純水中，再加入25μl試劑B和25μl試劑C，混勻。（避光放置，2小時內使用）
9. 除去PBS液，每張切片加50μl~100μl新鮮配制的DAB顯色液（需完全覆蓋組織），室溫下
孵育5分鐘，顯微鏡下觀察控制顯色時間。
10. 自來水沖洗2min；蘇木素復染；如有必要，可用0.1%HCl分化，自來水沖洗，PBS返藍。
11. 切片經梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。
六、結果： 陽性結果為在抗原定位處染棕黃或棕褐色。
七、可能出現的問題及解決辦法
1. 脫蠟不徹底，容易出現非特異性背景染色，建議免疫組化切片脫蠟與常規HE脫蠟分開。
2. 操作過程中沖洗不充分，容易出現非特異性背景染色，需嚴格控制沖洗時間與次數。
3. 為防止可能出現的假陽性、假陰性結果，建議在實驗過程設置陽性與陰性對照。
4. 操作中滴加試劑時緩沖液PBS未瀝干致使試劑稀釋，將引起染色強度變弱或假陰性發生。因此，每步滴加試劑前應將組織片上的PBS液除干，但又必須預防干片。
