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一、試劑盒說明

檸檬酸鈉-EDTA 抗原修復液是一種常用的抗原修復液，結合了檸檬酸鈉和 EDTA 進行抗原修復的優點，可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復。細胞或組織用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后，會導致蛋白之間的交聯(cross-link)，從而遮蔽樣品的抗原位點，導致免疫染色時染色信號減弱，甚至出現一些假陽性染色結果。

本抗原修復液采用了常用的檸檬酸鈉緩沖液和 EDTA，結合了兩者修復抗原的優點，并經過適當優化，可以更加有效地去除醛類固定試劑導致的蛋白之間的交聯，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

通常石蠟切片都需進行抗原修復處理，而冰凍切片可以不進行抗原修復處理。抗原修復會大大改善石蠟切片的免疫染色效果，但對于冰凍切片的染色效果很多文獻資料表明也有顯著改善。特別是當冰凍切片免疫染色效果欠佳時，可以考慮嘗試進行抗原修復。從原理上來看，無論冰凍切片還是細胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定的樣品，進行抗原修復都會有效去除蛋白。

一個包裝的本產品可以配制成 5000 毫升抗原修復液(1X)。按照每個片子需要 10 毫升抗原修復液(1X)計算，一個包裝的本產品可以用于 500 個樣品。

二、試劑盒組份

三、使用注意事項

抗原修復過程可使用染色缸和染色架或郵寄夾進行操作。塑料染色缸、染色架和郵寄夾可以很好地耐受沸水浴，而玻璃染色缸需避免驟冷驟熱導致的玻璃破碎。

抗原修復液使用前必須用重蒸水或 MilliQ 水稀釋 10 倍，配制成抗原修復液(1X)。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

四、操作方法

1. 對于石蠟切片：

a. 脫蠟：切片在二甲苯中脫蠟 5 分鐘，再換用新鮮的二甲苯脫蠟，共用二甲苯脫蠟3次,無水乙醇 5 分鐘，兩次。90%乙醇 5 分鐘，兩次，70％乙醇 5 分鐘，一次。蒸餾水 5 分鐘，兩次。

b. 抗原修復：將切片浸泡在抗原修復液(1X)中，95-100℃加熱約 20 分鐘(加熱時間可以控制在 10-30 分鐘內，的加熱時間需根據不同的樣品和目的蛋白自行摸索)。抗原修復液(1X)使用前需預熱到 95-100℃。加熱可以使用普通的水浴鍋，也可以使用微波爐加熱。如果使用微波爐加熱，需注意避免暴沸和過多的水分蒸發。隨后大約在 20-30 分鐘內冷卻至室溫。用免疫染色洗滌液洗滌 1-2 次，每次 3-5 分鐘。隨后即可進行封閉等后續的免疫染色步驟。

2. 對于冰凍切片：

用免疫染色洗滌液洗滌切片 5 分鐘。將切片浸泡在抗原修復液(1X)中，95-100℃加熱約 20 分鐘(加熱時間可以控制在 10-30 分鐘內，加熱時間需根據不同的樣品和目的蛋白自行摸索)。

抗原修復液(1X)使用前需預熱到 95-100℃。加熱可以使用普通的水浴鍋，也可以使用微波爐加熱。如使用微波爐加熱，需注意避免暴沸和過多的水分蒸發。隨后大約在 20-30 分鐘內冷卻至室溫。用免疫染色洗滌液洗滌 1-2 次，每次 3-5 分鐘。隨后即可進行封閉等后續的免疫染色步驟。

3. 對于其它樣品抗原修復，可參考石蠟切片或冰凍切片步驟進行。