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一． 試劑盒說明

EDTA 抗原修復(fù)液(EDTA Antigen Retrieval Solution)是一種常用的抗原修復(fù)液，可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù)。

細(xì)胞或組織用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后，會(huì)導(dǎo)致蛋白之間的交聯(lián)(cross-link)，從而遮蔽樣品的抗原位點(diǎn)，導(dǎo)致免疫染色時(shí)染色信號(hào)減弱，甚至出現(xiàn)一些假陽性染色結(jié)果。

本抗原修復(fù)液采用了廣泛使用的 EDTA，可以有效去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

通常石蠟切片都需進(jìn)行抗原修復(fù)處理，而冰凍切片可以不進(jìn)行抗原修復(fù)處理。抗原修復(fù)會(huì)大大改善石蠟切片的免疫染色效果，但對(duì)于冰凍切片的染色效果很多文獻(xiàn)資料表明也有顯著改善。特別是當(dāng)冰凍切片免疫染色效果欠佳時(shí)，可以考慮嘗試進(jìn)行抗原修復(fù)。從原理上來看，無論冰凍切片還是細(xì)胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定的樣品，進(jìn)行抗原修復(fù)都會(huì)有效去除蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

本產(chǎn)品特別適合用于石蠟切片，也可以用于冰凍切片等其它樣品。

一個(gè)包裝的本產(chǎn)品可以配制成 5000 毫升抗原修復(fù)液(1X)。按照每個(gè)片子需要 10 毫升抗原修復(fù)液(1X)計(jì)算，一個(gè)包裝的本產(chǎn)品可以用于 500個(gè)樣品。

二．試劑盒組份

三．使用注意事項(xiàng)

1. 抗原修復(fù)過程可使用染色缸和染色架或郵寄夾進(jìn)行操作。塑料染色缸、染色架和郵寄夾可以很好地耐受沸水浴，而玻璃染色缸需避免驟冷驟熱導(dǎo)致的玻璃破碎。

2. 抗原修復(fù)液使用前必須用重蒸水或 MilliQ 水稀釋 10 倍，配制成抗原修復(fù)液(1X)。

3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

四.操作方法

1. 對(duì)于石蠟切片：

a. 脫蠟：切片在二甲苯中脫蠟 5 分鐘，再換用新鮮的二甲苯脫蠟，共用二甲苯脫蠟 3 次。無水乙醇 5分鐘，兩次。90%乙醇 5 分鐘，兩次，70％乙醇 5 分鐘，一次。蒸餾水 5 分鐘，兩次。

b. 抗原修復(fù)：將切片浸泡在抗原修復(fù)液(1X)中，95-100℃加熱約 20 分鐘(加熱時(shí)間可以控制在 10-30 分鐘內(nèi)，的加熱時(shí)間需根據(jù)不同的樣品和目的蛋白自行摸索)。抗原修復(fù)液(1X)使用前需預(yù)熱到 95-100℃。加熱可以使用普通的水浴鍋，也可以使用微波爐加熱。如果使用微波爐加熱，需注意避免暴沸和過多的水分蒸發(fā)。隨后大約在 20-30 分鐘內(nèi)冷卻至室溫。用免疫染色洗滌液洗滌 1-2 次，每次 3-5 分鐘。隨后即可進(jìn)行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。

2. 對(duì)于冰凍切片：

用免疫染色洗滌液洗滌切片 5 分鐘。將切片浸泡在抗原修復(fù)液(1X)中，95-100℃加熱約 20 分鐘(加熱時(shí)間可以控制在 10-30 分鐘內(nèi)，加熱時(shí)間需根據(jù)不同的樣品和目的蛋白自行摸索)。抗原修復(fù)液(1X)使用前需預(yù)熱到 95-100℃。加熱可以使用普通的水浴鍋，也可以使用微波爐加熱。如使用微波爐加熱，需注意避免暴沸和過多的水分蒸發(fā)。隨后大約在 20-30 分鐘內(nèi)冷卻至室溫。用免疫染色洗滌液洗滌 1-2 次，每次 3-5 分鐘。隨后即可進(jìn)行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。

3. 對(duì)于其它樣品抗原修復(fù)，可參考石蠟切片或冰凍切片步驟進(jìn)行。