本產(chǎn)品具有從雙鏈DNA的3′-OH末端降解生成5′-單核苷酸的3′→5′外切酶活性。本酶對雙鏈DNA具有高度特異性，能降解平滑末端、3′凹陷末端及有切口的DNA，但是不能降解3′-突出末端。所以，可以用產(chǎn)生不同末端的限制酶通過雙重降解（Double digestion）后，利用核酸外切酶III的3′→5′的外切酶活性，從一端降解，得到互補(bǔ)的單鏈DNA和5′-P單核苷酸。與核酸酶相比，本酶的堿基特異性較小，如在富含GC的位置上，由于反應(yīng)停止的機(jī)率較低，可用于DNA的刪除制作。