● 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管
底，避免開蓋時試劑損失。
● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
● 使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清
洗并徹底清除殘留清潔劑。
● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
使用方法：
使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
1、 取500mg-1g 絲狀真菌樣本，采用以下其中一種方法處理：
I． 加入3ml 提取液后用勻漿機/Dounce 勻漿器勻漿。
II． 置于研缽中用液氮研磨，研磨后加入3ml 冷的提取液 。
III． 加入3ml 提取液直接置冰上研磨。
2、 將勻漿用250 目細(xì)胞篩或3 層紗布或脫脂棉過濾。或者在4℃，100×g 力條件
下離心1 分鐘，收集上清，棄沉淀。
3、 將濾液700g 離心10 分鐘，取上清。
4、 將上清11000g 離心20 分鐘。
5、 棄上清，留沉淀。
6、 每200ul 蛋白提取液B 中加入1ul 蛋白酶抑制劑混合物混勻。用200-400ul 蛋
白提取液B 重懸沉淀，在4℃條件下振蕩20 分鐘，至無明顯沉淀。
7、 在4℃，14000g 條件下離心15 分鐘。
8、 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到真菌線粒體蛋白。
9、 將上述蛋白提取物定量①后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灑凇?/div>
注：
① 建議用BCA 法進行蛋白定量。
② 蛋白樣品－80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。
