過氧化物酶體增殖物激活受體α免疫分析技術
實驗技術原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)水平。用純化的大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)，再與HRP標記的過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)濃度。
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品：9.0ng/ml 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml×1 瓶
操作步驟：
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔，在一、第二孔中分別加標
準品100μl，然后在一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從一孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為6.0ng/ml, 4.0ng/ml , 2.0ng/ml, 1.0ng/ml, 0.5ng/ml）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。
