小鼠ELISA試劑盒利用雙抗夾心法，在96孔板中預(yù)包被了小鼠胰島素蛋白的單克隆抗體，將標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品，以及樣品加入到96孔板中孵育結(jié)合，經(jīng)過洗滌，再加入 HRP-偶聯(lián)的胰島素多克隆抗體進(jìn)行孵育，在加入TMB底物，HRP與底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物。吸光值越高，對應(yīng)樣品中胰島素含量越多。
    小鼠ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。下面分析小鼠ELISA試劑盒試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的處理方法。
    一、選擇試劑
    選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
    二、加樣
    可能原因：
    1、血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
    2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 
    3、加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
    解決辦法：
    1、標(biāo)本為血清：zui好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
    2、加樣后及時放入孵箱。
    3、加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 
    4、如果采用AT或其他全自動加樣，zui好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
    5、標(biāo)本較多時，請分批操作。
    三、 孵育
    可能原因：
    1、孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 
    2、孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。
    解決辦法：
    1、貼封片或加蓋； 
    2、按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
    四、洗板
    ELISA試劑盒可能原因：
    1、采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。 
    2、采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
    3、反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
    解決辦法：
    1、保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后zui好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
    2、合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
    五、顯色
    可能原因：
    1、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 
    2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
    解決辦法： 
    1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 
    2、加樣時保持顯色劑不外流； 
    3、A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
    六、終止
    可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
    七、讀板
    如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸； 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
    小鼠ELISA試劑盒在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。