1、雙抗體夾心法

屬于非競爭結合，檢測抗原常用的方法，檢測含有至少兩個抗原決定簇的多價抗原。原理是先將特異性抗體與固相載體連接；加入待測標本，形成固相抗原抗體復合物；再加入酶標抗體形成雙抗體夾心，洗滌；加底物顯色，根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量檢測。

如血清標本中有類風濕因子（RF） 存在，則可出現假陽性反應，因為RF是一種抗變性IgG的自身抗體，它能與多種動物的變性IgG的Fc部分結合，因此RF就可作為固相抗體和酶標抗體之間的橋接抗原。

雙抗體夾心法只適用于二價或以上的較大分子抗原的測定，不能用于小分子半抗原的檢測。

2、雙位點一步法

針對抗原分子上兩個不同且空間距離較遠的決定簇，包被使用一種單抗，酶標記使用另一種單抗。測定時將待測抗原和酶標抗體同時加入，溫育、洗滌，加入底物顯色。若待測抗原濃度過高時，過量的抗原可分別同固相抗體和酶標抗體結合而抑制夾心復合物的形成，出現鉤狀效應 ，顯色降低，甚至假陰性。必要時可將標本經過適當稀釋后重復測定。

3、競爭法

用于測定小分子抗原，如藥物、激素 等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相，然后同時加入待測樣本和酶標記的小分子 ，兩種小分子競爭與固相上的抗小分子的特異性抗體結合，溫育一定時間后洗滌，加入酶底物顯色。

特點是：

①酶標記抗原與樣品或標準品中的非標記抗原具有相同的與固相抗體結合的能力；

②反應體系中，固相抗體和酶標抗原是固定限量 ，且前者的結合位點少于酶標記和非標記抗原的分子數量和；

③免疫反應后，結合于固相載體上復合物中被測定的酶標抗原的量(酶活性)與樣品或標準品中非標記抗原的濃度成反比。