分離單核細胞的實驗要點
發布時間：2017-03-23瀏覽次數：1059返回列表
單核細胞的分離
1. 離心后單核細胞存在于Percoll分層液（Ⅱ）和（Ⅲ）（密度較小的部分）之間的界面中。
2. 用毛細吸管仔細收集單核細胞。
3. 用含1-5%胎牛血清的 1×PBS液洗滌細胞3次，4℃，400×g離心5分鐘，棄上清液。
4. 若需要進一步實驗，將細胞重新懸浮于培養基中。
5. 用臺盼藍拒染法測定細胞存活率。
結果：本法回收的細胞中單核細胞占70-（存活率應大于90%），淋巴細胞占0-20%，粒細胞占0-5%，紅細胞占0-7%，血小板小于0.5%。
實驗要點
1.為了得到較好的結果，外周血單個核細胞分離后應立即使用。
2.所有操作過程應在18-20℃中進行。
3.仔細覆蓋各種Percoll分層液，避免破壞其界面。
4.洗滌分離細胞3次，以除去殘存的Percoll分層液和血小板。
5.如果所制備的細胞仍不純，可使用包被有抗CD2、抗CD3、抗CD19抗體分子的磁珠，以除去殘存的NK、T、B淋巴細胞。
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