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恒溫金屬浴操作方法及常見問題對策

發布時間:2014-01-13瀏覽次數:1207返回列表

  本公司作為一家專業性科學儀器銷售公司,在科儀領域及相關行業享有較高聲譽,是德國Sartorius 、Sigma、韓國FINEPCR 、英國ELGA、西班牙TELSTAR、美國Thermo、美國DENVER等多個外知名品牌的一級代理,并可從事進出口貿易。下面詳細介紹恒溫金屬常見問題對策:

  1.變性溫度與時間PCR反應中模板DNA的變性十分重要。只有完全性的模板DNA和PCR產物雙鏈完全解開,才能有效的和引物結合。這種結合是PCR擴增的基礎。變性溫度越高,時間越長變性就越充分。

  但溫度過高、時間過長又會影響Taq DNA聚合酶的活性,所以通常選用變性溫度為95℃30s為宜。在PCR反應中個循環變性重要,需時間較長,因模板DNA的鏈比較長。

  2.復性溫度與時間變性溫度是PCR反應成敗的關鍵,復性溫度決定著PCR的特異性。溫度越低復性越好,但是容易出現引物與靶DNA的錯配,增加非特異性結合,溫度太高不利于復性,大多數PCR反應的復性溫度在55℃左右。確定了復性溫度后,復性時間并不是關鍵因素。但復性時間太長會增加非特異的復性。