熒光定量PCR(Fluorogenic Quantitative PCR，簡(jiǎn)稱FQ-PCR)技術(shù)融匯PCR和DNA探針雜交技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，直接探測(cè)PCR過(guò)程中熒光信號(hào)的變化,根據(jù)PCR反應(yīng)酶動(dòng)力學(xué)特點(diǎn),獲得DNA模塊的準(zhǔn)確定量結(jié)果。該技術(shù)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程均在完全閉管的狀態(tài)下進(jìn)行，無(wú)需PCR后處理和冗長(zhǎng)的電泳檢測(cè)，解決了常規(guī)PCR實(shí)驗(yàn)不能定量分析及擴(kuò)增產(chǎn)物污染而導(dǎo)致的假陽(yáng)性，操作繁復(fù)等問(wèn)題，成為常規(guī)PCR的新?lián)Q代技術(shù)，是目前的PCR技術(shù)。
生物學(xué)基礎(chǔ)
按PCR方式進(jìn)行的體外基因擴(kuò)增。
酶學(xué)基礎(chǔ)
Taq酶的 5'→3' 外切核酸酶活性，可以在鏈延伸過(guò)程中實(shí)現(xiàn)鏈替換，并將被替換的單鏈切斷。
熒光化學(xué)基礎(chǔ)
反應(yīng)體系中，不僅有兩條普通的引物，還有一條熒光標(biāo)記探針。這條探針的5'端和3'端分別標(biāo)記了熒光報(bào)告基因(R)和熒光淬滅基團(tuán)(Q)，當(dāng)這條探針保持完整時(shí)，一旦探針被切斷,淬滅作用消失,R基團(tuán)的熒光信號(hào)就可以被測(cè)定。連續(xù)檢測(cè)熒光的強(qiáng)度與待測(cè)的DNA濃度呈正比。
FQ-PCR 反應(yīng)的實(shí)現(xiàn)
熒光標(biāo)記探針結(jié)合在PCR擴(kuò)增區(qū)的中間。PCR反應(yīng)開(kāi)始后，隨著鏈的延伸，Taq酶將熒光探針切斷,釋放出R基團(tuán)的熒光信號(hào)。被釋放的游離R基團(tuán)的熒光信號(hào)強(qiáng)弱與PCR產(chǎn)物數(shù)量成正比關(guān)系，測(cè)量出前者就可以算出后者。
FQ-PCR 技術(shù)指標(biāo)
定量范圍：0~1010/ml樣品
定量準(zhǔn)確度：±
熒光5'核酸酶化學(xué)

近展開(kāi)了一項(xiàng)，關(guān)于食品安全的大檢查。俗話說(shuō)民以食為天，食品安全關(guān)乎人的生命安全。從前幾年的三聚氰胺到后來(lái)的蘇丹紅，又有問(wèn)題奶等很多的食品安全問(wèn)題的出現(xiàn)。現(xiàn)在人的生病率高了，很大一部分和飲食是有關(guān)系的。

根據(jù)預(yù)測(cè)到2025年人口將達(dá)到80億，面對(duì)有限的耕地資源，糧食問(wèn)題日益突出。轉(zhuǎn)基因作物不僅產(chǎn)量高，品質(zhì)優(yōu)良而且抵御災(zāi)害的能力強(qiáng)，一度被各國(guó)大力推崇，甚至被譽(yù)為第二次“綠色革命”，但是轉(zhuǎn)基因作為在食品安全方面的爭(zhēng)論一直不斷，再加之各國(guó)政府對(duì)轉(zhuǎn)基因作物采取謹(jǐn)慎的態(tài)度，要求對(duì)其進(jìn)行必要檢測(cè)需檢測(cè)之后才能入關(guān)。熒光定量 PCR 方法是外進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分含量檢測(cè)的常用方法，已經(jīng)用于基因大豆、玉米等的檢測(cè)中。我國(guó)針對(duì)這一情況也出臺(tái)了相應(yīng)的政策，例如中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SNT 1204-2003中要求利用實(shí)時(shí)熒光PCR對(duì) 植物及其加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行定性檢驗(yàn).

那么我們?cè)趺礃釉谑称返脑搭^來(lái)解決這些問(wèn)題的出現(xiàn)呢？

熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)準(zhǔn)確，快速，重復(fù)性高在食品安全領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。目前已經(jīng)應(yīng)用于食源性致病病毒、 食品過(guò)敏源 、轉(zhuǎn)基因食品、 乳品等檢測(cè)。

在食源性致病病毒檢測(cè)中，長(zhǎng)期以來(lái)采用細(xì)菌培養(yǎng)法但是這種方法檢測(cè)周期長(zhǎng)，靈敏度低，操作復(fù)雜，熒光定量PCR技術(shù)動(dòng)態(tài)范圍寬，靈敏度高，檢測(cè)速度快（40-60 min），已在副溶血性弧菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和和阪崎腸桿菌等食源性細(xì)菌檢測(cè)中越來(lái)越重要。熒光PCR對(duì)2084個(gè)感染性腹瀉標(biāo)本的檢測(cè)，其中培養(yǎng)法陽(yáng)性檢出率為45.2%而熒光PCR為90.1%。再如我國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SNT 1870-2007中規(guī)定對(duì)食品中致病菌檢測(cè)方法使用熒光PCR方法，SN/T 1632.3-2005中要求使用熒光PCR方法檢測(cè)奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法。
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