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非洲豬瘟檢測(cè)中窗口期的確定方法
發(fā)布時(shí)間:2019-06-24瀏覽次數(shù):1691返回列表
非洲豬瘟病毒的附著力到底有多強(qiáng)?直接接觸或者攜帶病毒的物品再次傳播的能力有多強(qiáng)?尚不清晰。目前已知非洲豬瘟是高度接觸性傳播的急性、烈性病毒,主要通過(guò)接觸或采食受非洲豬瘟病毒污染的物品,以及通過(guò)昆蟲(chóng)吸血而傳染。短距離可經(jīng)空氣傳播、污染的飼料、泔水、剩菜及肉屑、欄舍、車輛、器具和衣服等均可間接傳播本病。今天我們主要介紹非洲豬瘟檢測(cè)中窗口期的確定方法。
確定豬只是否處于窗口期的方法很多,如病毒培養(yǎng)法、免疫組織熒光法、抗原檢測(cè)法等,但當(dāng)前成熟的方法還是定性或定量的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法。
檢測(cè)樣本的選擇 根據(jù)研究數(shù)據(jù),口腔拭子、鼻腔拭子都可以作為窗口期的檢測(cè)樣本,但是新鮮分泌的唾液往往具有大的檢測(cè),其病毒含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于口腔拭子和鼻腔拭子。新鮮分泌的唾液中非洲豬瘟病毒CT值比口鼻拭子中的非洲豬瘟病毒CT值平均低5左右。
唾液樣本處理 處于窗口期的豬只,尚具備較強(qiáng)的特異性免疫能力和非特異性免疫能力,機(jī)體對(duì)病毒的清除作用較強(qiáng),兩者處于激烈對(duì)抗?fàn)顟B(tài),尤其是唾液中的酶(溶菌酶、核酸酶、堿性磷酸酶等)活性較高,收集到唾液中的非洲豬瘟病毒如果含量過(guò)低,病毒很快將被唾液降解。因此,采集的唾液必須立即進(jìn)行核酸保護(hù)(即抑制唾液中的酶活性)。
唾液樣本檢測(cè) 由于處于窗口期內(nèi)唾液樣本中非洲豬瘟病毒含量較低,對(duì)檢測(cè)條件的要求較為苛刻。建議對(duì)檢測(cè)環(huán)境(溫度、空氣、水、操作臺(tái)面)、檢測(cè)試劑套裝、檢測(cè)儀器進(jìn)行比對(duì)和考核,慎重選擇。為了取得優(yōu)質(zhì)的唾液樣本,采樣之前需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行禁食處理(12小時(shí))。
研究證實(shí),試管唾液中的病毒在靜置或離心狀態(tài)下,底部的非洲豬瘟病毒含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于試管上清中的病毒含量(CT值相差1~3),所以建議從試管底部取樣進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)施實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作之前,建議對(duì)操作人員進(jìn)行科學(xué)采樣和取樣培訓(xùn),培訓(xùn)合格后才允許從事檢測(cè)工作。
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