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熒光探針PCR用基因擴增儀的原理
發布時間:2013-12-30瀏覽次數:2134返回列表
基因擴增技術-聚合酶鏈反應又稱無細胞分子克隆系統或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增法,是基因擴增技術的一次重大革新。
PCR擴增DNA的原理是:先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈,然后加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物,即左右引物。
擴增過程中,單核苷酸的錯誤參入程度很低、其錯配率一般只有約萬分之一,足可以提供特異性分析,選用各型病毒相對的特異寡核苷酸引物。
擴增產物可直接供作序列分析和分子克隆,擺脫繁瑣的基因方法,可直接從RNA或染色體DNA中或部分DNA已降解的樣品中分離目的基因,省去常規方法中須行克隆后再作序列分析的冗繁程序。
PCR標本的制備
在將Taq DNA聚合酶引入PCR反應,并使之達到自動化之后,許多PCR的失敗都歸因于標本的制備不當。用于PCR的標本必須經適當處理后才能使用,因為標本中的許多雜質能抑制Taq DNA聚合酶的活性。
另外,處理標本可使待擴增DNA暴露,能與引物復性。關于PCR標本制備各種專業書中介紹了許多,我們實驗發現操作復雜、不慎便容易造成污染,且不實用。現介紹一種簡單快速的處理方法即3%異硫氰酸胍和待檢標本混合100℃,10min,離心取上清作為PCR模板即可。


