ELISA試劑盒為什么要嚴格按照說明書操作?

  市面上銷售的ELISA試劑盒種類繁多，不同指標的檢測范圍及實驗方法不盡相同，甚至相同指標不同廠家的試劑盒實驗方法都可能會不一樣。但基本原理都是一致的，是將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上，進行免疫反應的定性和定量方法。

  每一個試劑盒里都會有對應的說明書，注意事項里大多都會提到“實驗嚴格按照說明書的操作進行”。為什么要嚴格按照說明書操作?為了完整的回答這個問題，需要先回顧一下ELISA各種方法的原理。

  根據試劑的來源和標本的性狀及檢測的具體條件，可設計出不同類型的檢測方法。大致分為以下幾類：

  1.雙抗體夾心法測抗原;2.雙抗原夾心法測抗體;3.競爭法測抗原;4.間接法測抗體回顧完原理。

  下面總結如果不按說明書操作可能會出現的不滿意結果。

  1.先說嚴重的操作錯誤，看錯或壓根不看試劑盒配套說明書，不按操作步驟加樣。比如把競爭法的試劑盒當作雙抗體夾心法來做，導致的結果就是整板顯示很強的藍色，無任何梯度。

  2.混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒，所含的試劑成分很可能是不一樣的，混用導致的結果是，浪費珍貴的樣本，樣品的回收率達不到預期值，如果混用不同試劑盒的酶復合物，會導致顯色過弱或過強，因為每種試劑盒所用酶復合物效價可能不一樣。

  3.不看文獻或者不做預實驗。比如某個試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻報道推算樣本應該1:10稀釋，結果稀釋成1:1000，導致的結果是顯色過弱，結果不可用。

  4.不校準移液器及培養箱的溫度濕度。導致工作試劑濃度不準確，孵育溫度不合適，實驗帶來誤差。

  5.洗滌不充分，每孔洗液加樣過少，或者殘留。導致的結果是顯色過快，同時背景較高。

  6.手洗板時所用槍頭沒有懸空加入洗液，導致洗液污染，整個實驗失敗。

  7.剩余酶標板條未及時放入干燥袋，導致酶標板受潮，下一次再做時，顯色過弱或污染，CV值過高。

  8.試劑盒保存條件不當。試劑盒要求放4℃的，放在了-20℃。或者要求放-20℃的，放在了4℃。均會導致試劑盒敏感性下降。

  以上只是常見的操作錯誤。順利完成一次ELISA實驗需要注意的細節很多，許多操作環節都影響到檢測的質量。

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