倉鼠E選擇素酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟

  倉鼠E選擇素酶聯(lián)免疫試劑盒 試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中SELE 表達。用純化的SELE 抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中SELE 相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的SELE 抗體結合，形成抗體 抗原 酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中SELE 的存在與否。

  操作步驟：

  1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)

  2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50%l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40%l，然后再加待測樣品 10%l。加樣將樣品加 于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

  3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

  4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50%l，空白孔除外。

  7. 溫育：操作同 3。

  8. 洗滌：操作同 5。

  9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50%l，再加入顯色劑 B50%l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.10. 終止：每孔加終止液 50%l，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

  11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

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