干粉型LB培養(yǎng)基(LB Medium Powder)

  產(chǎn)品及特點(diǎn)：

  LB培養(yǎng)基全名是Lysogeny Broth(非Luria-Bertani),它是由美國(guó)科學(xué)家Giuseppe Bertani在1951年開(kāi)發(fā)。但現(xiàn)在常用的LB配方是由Miller修改而成,主要是去掉Glucose并把NaCl濃度從0.5 g/L增加到10 g/L。本產(chǎn)品就是根據(jù)Miller配方制備的干粉型培養(yǎng)基,本產(chǎn)品加水滅菌后即得液體培養(yǎng)基,即可使用。

  常溫運(yùn)輸及保存,有效期兩年。

  干粉型LB培養(yǎng)基(LB Medium Powder)操作步驟

  (一)獲得目的基因

  1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

  2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

  (二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

  1、干粉型LB培養(yǎng)基(LB Medium Powder)載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性?xún)?nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

  2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

  (三) 獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

  1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

  2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

  3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

  (四)誘導(dǎo)表達(dá)

  1、 干粉型LB培養(yǎng)基(LB Medium Powder)挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

  2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

  3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

  4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

  5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

  干粉型LB培養(yǎng)基(LB Medium Powder) 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專(zhuān)門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷(xiāo)售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷(xiāo)多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿(mǎn)足客戶(hù)的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶(hù)需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶(hù)滿(mǎn)意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。