本試劑盒按每個(gè)樣品500μL計(jì)算，可供200-1000次檢測(cè)。CA最大激發(fā)波長(zhǎng)495nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)515nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm左右，發(fā)射波長(zhǎng)為510～530nm。可以使用流式細(xì)胞儀或激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)mPTP的變化。...

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● Hanks balanced salt solution（HBSS）或HEPES或PBS ● 移液器 ● 流式細(xì)胞儀/激光共聚焦顯微鏡

注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

● 染色后立即進(jìn)行分析。

● 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定最佳條件。以下方法僅供參考。

● CA1容易受潮，穩(wěn)定性較差，注意干燥保存。

使用方法：

1、染色工作液的配制：

1.1 1×MPTP 染色buffer配制：用純水10倍稀釋10×MPTP染色buffer， 配制1×MPTP染色buffer。

1.2 CA1染色工作液配制：根據(jù)樣品數(shù)量用1×MPTP 染色buffer稀釋CA1探針500倍，配制成CA1染色工作液，充分混勻。

2、細(xì)胞染色

2.1 將樣品細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液，使其密度為1×10⁶細(xì)胞/mL。

【注】：

● 用于加Ca²⁺通透劑的對(duì)照樣品的緩沖液必須含有Ca²⁺；

● CA1探針加載時(shí)不能含有血清；

● 細(xì)胞必須為單細(xì)胞懸液。

2.2 按照500μL每管將細(xì)胞懸液等分，每個(gè)樣品等分成3份，并記錄編號(hào)。

【注】：

● 后續(xù)染色順序：1號(hào)管僅含CA1探針，2號(hào)管含CA1探針和淬滅劑，3號(hào)管含CA1探針，淬滅劑和通透劑，另外準(zhǔn)備一管不加試劑的細(xì)胞樣品用于相應(yīng)的儀器設(shè)置。

2.3 向上述每個(gè)樣品的3管中分別加入3μL CA1探針工作液并混勻。

【注】：

● 推薦該探針加載濃度在200-400倍稀釋，具體的使用濃度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行優(yōu)化。為了避免過(guò)度加載造成細(xì)胞毒性，建議在取得有效結(jié)果的基礎(chǔ)上盡量使用最低探針濃度。

2.4 向2號(hào)、3號(hào)管中加入5μL淬滅劑，并混勻。

2.5 向3號(hào)管中加入5μL 通透劑，并混勻。

2.6 在37℃避光孵育15分鐘。

2.7 向每管中加入3mL 1×MPTP染色buffer，離心收集細(xì)胞。

【注】：

● 此步可去除多余染料以及可能引起熒光淬滅的試劑。

2.8 用400μL同時(shí)可用于流式檢測(cè)的合適的緩沖液重懸細(xì)胞。

【注】：

● 如果需要，也可進(jìn)行進(jìn)一步染色。如用標(biāo)記的Annexin V檢測(cè)磷酯酰絲氨酸易位(HR0399)；用PI檢測(cè)細(xì)胞活力；或者用M11探針檢測(cè)線粒體活力等。注意整個(gè)過(guò)程均需避光操作。

2.9 染色后，將樣品置于冰上，1 小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式分析。

3、細(xì)胞檢測(cè)

用不含試劑的細(xì)胞樣品進(jìn)行相應(yīng)的儀器設(shè)置。用流式488 激發(fā)器進(jìn)行熒光分析，CA1探針最大激發(fā)波長(zhǎng)495nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)515nm。

1號(hào)管-僅含CA1探針：線粒體和胞漿有熒光，熒光信號(hào)較強(qiáng)；

2號(hào)管-含CA1探針和淬滅劑：僅線粒體呈現(xiàn)熒光，熒光強(qiáng)度居中；

3號(hào)管-含CA1探針，淬滅劑和通透劑：線粒體和胞漿熒光均被淬滅，熒光信號(hào)最弱。

2號(hào)管和3號(hào)管熒光信號(hào)的變化說(shuō)明線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔被不斷的激活。

如果您覺(jué)得“HR0959-100T 線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔(MPTP)檢測(cè)試劑盒”描述資料不夠齊全，請(qǐng)聯(lián)系我們獲取詳細(xì)資料。(聯(lián)系時(shí)請(qǐng)告訴我從給覽網(wǎng)看到的，我們將給您最大優(yōu)惠！)
本頁(yè)鏈接：http://www.lgsztm.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-9426208.html
已經(jīng)有965位訪客查看了本頁(yè).