熒光探針M01通常不會明顯影響細胞的活力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑（long-term tracer）。除了最簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）檢測脂在細胞膜上...

檢測方法：

● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦

樣本類型：

● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 熒光顯微鏡/激光共聚焦 ● 離心機 ● 移液器 ● PBS ● HBSS(無酚紅) 

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

● 標記的條件因細胞種類而異，根據不同樣本的實際染色結果做相應調整，在每次實驗前，請先根據不同的實驗要求、細胞類型、細胞的膜通透性等進行優化，確定最佳條件。以下方法及供參考。

● 染色后立即進行分析。

● 本染色液可用于細胞涂片、細胞的檢測。

使用方法：

一、染色工作液的配制：

根據樣本數量，用37℃培養箱預熱染料稀釋液試劑B將M01熒光染料10倍稀釋。再用相應的無血清培養基或其他緩沖液（如HBSS、PBS等）將探針M01進行40-200倍稀釋，配制成染色工作液。

【注】：

● 也可不用本盒中的試劑B，直接用相應的無血清培養基或HBSS等緩沖液稀釋M01染料至所需濃度。

● 開始實驗前，使用無血清培養基或HBSS緩沖液稀釋染料儲存液到需要的工作濃度。工作濃度應根據不同細胞的預實驗結果確定的最佳工作濃度，建議至少在超過10倍范圍的濃度下進行測試。一般染色終濃度400-2000倍稀釋，1000-2000倍適合大多數細胞樣本。

● 建議收到產品后，根據使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩定。

● 工作液現配現用。

● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

● 若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育，熒光信號會衰減。

二、細胞染色

A：懸浮細胞染色

1、用PBS洗滌細胞2次。

【注】：

● 500×g離心5分鐘。

2、加入適量體積的染色工作液重懸細胞，使其密度大約為1×10⁶/mL。

3、在37℃孵育細胞5～20分鐘，不同的細胞最佳培養時間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記結果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

4、孵育結束，500×g離心5分鐘。

5、傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的培養液重懸細胞。

6、重復（4），（5）步驟兩次以上

B：貼壁細胞染色

1、用PBS洗滌細胞2次。

2、細胞培養板中或細胞爬片上加入適量體積的染色工作液。

【注】：

● 96孔細胞培養板每孔加入100μL染色液即可。

3、37℃孵育細胞5～20分鐘，不同的細胞最佳培養時間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記結果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

4、吸干染色工作液，用培養液洗培養板或蓋玻片2～3次，每次用預熱的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10分鐘，然后吸干培養基。

三、用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測

最大激發波長為488nm，最大發射波長為500nm。

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