豬傳染性胃腸炎病毒熒光RT-PC是高品質的病毒PCR檢測試劑盒產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于生化實驗研究等領域，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多豬傳染性胃腸炎病毒熒光RT-PC等病毒PCR檢測試劑盒產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括豬傳染性胃腸炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：豬傳染性胃腸炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒
英文名稱：TGEV Fluorescent qRT-PCR Kit
產品貨號：BTN11-215
產品規格：50次

豬傳染性胃腸炎(TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。由于它主要引起2 周齡以下仔豬幾乎死亡，所以及早確診對該病的防治具有特別重要的意義。豬傳染性胃腸炎病毒的傳統診斷方法主要有病毒的分離鑒定、免疫熒光抗體試驗、免疫電鏡觀察和ELISA等方法。但這些方法操作過程繁瑣、操作難度大，所需要時間較長，專一性不強因此建立一種快速、高靈敏度的診斷方法對防治TGEV感染是十分必要的。本產品就是針對這一需求開發的實時定量RT-PCR產品。

產品特點：
1. 靈敏度高，分析靈敏度可以達到50拷貝/uL，遠高于細菌培養法，也比常規的RT-PCR檢測高100倍。
2. 特異性高，根據TGEV的N基因保守區設計引物，不會誤檢其他豬的病原性病毒（如豬輪狀病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬圓環病毒、豬偽狂犬病毒、豬細小病毒和豬瘟病毒等）。
3. 一管封閉式，避免了RT-PCR產物對后續RT-PCR的污染。
4. 線性范圍廣，在10-107拷貝/uL的靶分子濃度范圍內均呈線性。
5. 簡單快捷，只需要2小時即可得到實驗結果。

產品組成：

組分	規格
即用型熒光PCR Mix	750μl
TGEV專一性引物對	100μL
TGEV陽性對照	50μl
超純水	1mL

保存條件：-20℃避光保存，有效期12個月。

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本試劑盒適用于各種咽拭子、鼻拭子樣品等臨床樣品中偏肺病毒/博卡病毒的特異性檢測。適用于偏肺病毒/博卡病毒感染的輔助診斷、監測及流行病學調查，其檢測結果僅供臨床參考。

本試劑盒用一對偏肺病毒型特異性引物，一對博卡病毒型特異性引物，分別結合一條特異性熒光探針，用一步法雙重熒光RT-PCR 技術對偏肺病毒/博卡病毒RNA 進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。本試劑盒中偏肺病毒型的探針報告基團為FAM，博卡病毒型的探針報告基團為VIC/HEX/JOE。

試劑盒組成：

組份	數量	規格
偏肺病毒/博卡病毒反應液(HMPV/HBocaV-qRT-PCR MIX)	1管	576μL/管
qRT酶混合物(qRT Enzymes MIX)	1管	192μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water)	1管	500μL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
偏肺病毒/博卡病毒陽性對照(HMPV/HBocaV-PTC)	1管	50μL/管

儲存條件：-20℃以下，有效期6個月。

使用方法：

一、樣品采集：
按照相關標準采集。標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-80℃，但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰壺。
?血清：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入無菌的干燥玻璃管，室溫(22-25℃)放置30-60min，血標本可自發完成凝集析出血清，或直接使用水平離心機，3000rpm離心5min，吸取上層血清，轉移至1.5mL滅菌離心管。
?血漿：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次，使抗凝劑與靜脈血充分混勻，5-10min后即可分離出血漿，轉移至1.5mL滅菌離心管。
?拭子、分泌物等樣品：在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500μL PBS或生理鹽水，劇烈振蕩30s。棉拭子盡量擠出液體轉移到無RNA酶污染的離心管中，6000rpm離心20s，取上清備用。
?病灶組織樣品：稱取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理鹽水研磨至無塊狀物，然后將樣品轉至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液于1.5mL滅菌離心管中。

二、RNA提取：
可采購北京百奧萊博科技有限公司生產的RNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業化產品，并按照相應試劑盒說明進行操作。
 注：陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取)，直接取4μL 加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區域加入陽性對照。

三、檢測步驟：
1．試劑的準備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR 反應液(HMPV/HBocaV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm 離心10s。
設所需要的PCR 反應管管數為N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：

試劑	每個反應加入的量	N個反應加入的量
熒光PCR反應液	12μL	N×12μL
酶混合物	4μL	N×4μL
總量	16μL	N×16μL

計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm 離心10s，向設定的N 個PCR 反應管中分別加入16μL，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(HMPV/HBocaV-PTC)4μL，10000rpm 瞬時離心10 秒。
2．qPCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內。推薦循環條件：

	反轉錄(Reverse Transcription)	1循環	50℃ for 30 min
預變性	1循環	95℃ for 5 min
PCR擴增	40循環	95℃ for 10 sec 55℃ for 45 sec

在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM和VIC(若儀器無VIC通道，可選擇HEX或JOE通道)。其中FAM基團檢測HMPV，VIC/HEX/JOE基團檢測HBocaV。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

四、結果分析：
1．結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
2．試驗成立判定
?陰性對照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均無擴增。
?陽性對照(HMPV/HBocaV-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有擴增。
?以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效
3．結果判定
?FAM通道：Ct值≤35HMPV核酸為陽性；Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明HMPV核酸陰性。
Ct值在35-40個循環之間，為灰區，需要進行重復試驗。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線，判為樣本陽性，表明HMPV核酸陽性；否則判為樣本陰性。
?VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 HBocaV核酸為陽性；Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明HBocaV核酸陰性。Ct值在35-40個循環之間，為灰區，需要進行重復試驗。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線，判為樣本陽性，表明HBocaV核酸陽性；否則判為樣本陰性。

五、注意事項：
?初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
?所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA 酶。
?PCR 操作應嚴格按照要求分區(試劑配制區、標本處理區、PCR 擴增區等)，防止實驗室污染。
?樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區的超凈工作臺進行，以免污染。
?試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

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