DNA片段化試劑是高品質的基因結構和功能產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多DNA片段化試劑等基因結構和功能產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括DNA片段化試劑在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：DNA片段化試劑
英文名稱：DNA Fragmentation Reagent
產品貨號：WH0207
產品規格：24次|96次

本制品為高通量測序平臺文庫構建配套試劑盒，用于文庫構建前的大片段DNA片段化。模塊利用時間依賴型酶促反應的原理，根據不同的作用時間將雙鏈DNA隨機切割成200~500 bp的片段，所得片段為平末端雙鏈DNA片段，5"端基團含有5"-P，3"端基團含有3"-OH，可直接進行后續的dA或adapter添加。通過本制品對雙鏈DNA隨機的切割，表明本產品不具堿基偏好性，且不同類型切割DNA片段的測序覆蓋率與機械切割一致。

適用范圍：為構建NGS文庫制備片段化的雙鏈DNA。
適用樣本量：1ng~1μg DNA

產品特點：
·無需特殊儀器設備，通過酶促反應簡便快速的片段化雙鏈DNA。
·使用靈活，通過調整片段化時間，靈活調整DNA片段化長度。
·反應，單個反應體系即可完成1ng～1μg DNA樣本的片段化。

產品組成：

組分	24次	96次
5×Frag Enzyme Mix	240μl	960μl
10×Frag Buffer	120μl	480μl
Nuclease-Free ddH2O	1ml	4×1ml

保存條件：-25~-15℃保存，避免反復凍融，保質期為一年。

注意事項：（請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項）
1．操作過程請注意避免核酸樣品和產物之間的交叉污染。
2．請使用不含RNA酶或DNA酶的槍頭、EP管進行試驗。
3．試驗開始前，請清潔操作臺，確保沒有RNA酶和DNA的污染。
4．進行文庫擴增前，請確保PCR儀已經調試好并處于穩定的狀態。
5．試驗前請仔細閱讀說明書，如果需要暫停試驗，或者無需立即進行下游試驗?？筛鶕f明書推薦將試驗產物保存于-20℃并安排后續試驗。

推薦使用的其他試劑：
1.DNA末端修復/加dA尾試劑（WH0209-01/02)
2.adapter快速連接試劑（WH0201-01/02）
3.NGS文庫富集試劑（WH0210-01/02)

操作步驟：

一、試驗準備
1.在開始實驗前，明確核酸的濃度及純度至關重要，推薦DNA上樣量為1ng~1μg。DNA需溶解于以下溶液中：去離子水、10mM Tris、Buffer EB或LoTE（0.1×TE）等。
注意：
?確定上樣DNA濃度至關重要，尤其在上樣量低于100 ng時。推薦使用Qubit、Picogreen或者其他染料法對DNA濃度進行準確定量。
?請確認DNA溶液中不含陽離子及螯合劑。如果DNA溶解于1×TE或不確定DNA溶液中的EDTA濃度，使用Agencourt AMPure XP磁珠進行純化。
2.將各試劑置于冰上，5×Frag Enzyme Mix融化后用手指后輕彈混勻，不要渦旋。其余試劑可短暫渦旋混勻。

二、試驗步驟
1.照下表設置PCR儀反應程序。開啟熱蓋，熱蓋溫度設置為70度。

操作步驟	溫度	時間
1	4℃	1min
2	32℃	3-22min*
3	65℃	30min
4	4℃	保持

*注：確切的片段化反應時間需要根據DNA的實際上樣量進行優化。下表1中列出100ng DNA片段化所需的時間。用戶可以依據此時間進行調整。調整過程中，我們推薦額外設置一個反應時間延長3min以及一個縮短3min的對照，這樣有助于確定切割至所需片段大小時所需要的準確反應時間。

表1：片段化時間選擇表

	片段化時間（min)（32℃)
DNA主峰大小	200bp	300bp	400bp	500bp
100ngDNA上樣量	15	8	5	3.5

圖1.100ng大腸桿菌基因組DNA片段化圖譜（3～22 min）

2．在薄壁管中按下表配制反應體系，冰上操作，各組分加入后，請輕柔吸打混勻，注意不要渦旋。

成分	用量（μl)
10×Frag Buffer	5
DNA樣本	X
Nuclease-Free ddH2O	（35-X)*
總體積	40

  *注：對于多個反應，請計算所需試劑的總體系并在此基礎上增加體系10%，以避免因溶液轉移過程中掛壁損失而造成分裝反應數不足的問題。
3．向薄壁管中加入10μl 5×Frag Enzyme Mix，輕柔吹打6～8次，不要渦旋。
  注：此過程需一直處于冰浴中進行。
4．將薄壁管短暫離心，收集溶液至管底后，立即轉移至4℃預冷的PCR儀中，啟動步驟1中的反應程序。
5．當反應程序結束，PCR儀溫度降至4℃后，將薄壁管從PCR儀中取出并置冰上。立即進行下一步實驗操作。

根據您的關注的DNA片段化試劑，您可能還對以下產品有需求：



名稱：CCK mRNA原位雜交試劑盒
貨號：ZN0219
規格：100T
基本信息：
保存條件：4℃保存一年
工作量：100張切片。
有效期：一年。
適用種屬：rat
標記方式：3’—尾段標記
試劑盒中內容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.預雜交液 2ml；
3.CCK mRNA原位雜交試劑盒寡核苷酸探針雜交液 2ml；
4.封閉液 5ml；
5.生物素化鼠抗地gāo辛 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化過氧化物酶 5ml。
用戶自備試劑：
原位雜交專用蓋玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
緩沖液(3%檸檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位雜交用 PBS)
一．培養細胞和冰凍切片
準備工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%檸檬酸——100ml蒸餾水中加檸檬酸(C6H8O7?H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸餾水中加氯化鈉17.6g，檸檬酸三鈉(C6H5O7Na3?2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸餾水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸餾水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸餾水即可。
原位雜交用PBS(1000ml蒸餾水加氯化鈉30g,Na2HPO4?12H2O 6g,NaH2PO4?2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：zuì重要的是及時固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。
1．玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．細胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進行培養，條件為37℃和5%的CO2，所用培養基為Dulbecco基礎培養基。細胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3．培養細胞和冰凍切片均可用下述方法固定：固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌，干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+純甲醇50份混合，室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
7．預雜交：濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。
8．雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據雜交情況可以調節)。
9．雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
10.滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地gāo辛：37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
12.滴加SABC：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
13.滴加生物素化過氧化物酶：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
14.DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑Ａ，Ｂ，C各一滴，混勻，加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
15.必要時蘇木素復染，充分水洗。
16.酒精脫水，二甲苯透明，封片。
二．石蠟切片
如果有條件的話，應盡可能地采用新鮮標本。標本離體后，及時予以固定。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。標本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊，固定1小時即可，較大的標本固定不要超過2小時。某些組織對過度固定尤其敏感，如動物大腦，固定時間30-40分鐘，一般不要超過1小時。
1．常規脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。
3．石蠟切片經常規脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化3--30分鐘(視標本新舊、厚薄自行調整)。用戶可以比較不同的消化時間，例如5分鐘,10分鐘，20分鐘，30分鐘。以找到zuì佳的消化時間。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。其余步驟和冰凍切片6-16步相同。
結果觀察：
CCK的細胞胞漿著色呈棕黃色。
注意事項：
由于特定的mRNA序列僅占總mRNA的少數，加上基因僅由四個堿基排列組合而成，因此原位雜交容易出現非特異性染色。通過不加探針和用陰性標本做對照，基本可以確定染色是否為特異性的。有明顯的非特異性染色現象時，用預雜交液對含探針的雜交液進行稀釋，一般稀釋2—10倍；并應加強探針雜交后的洗滌。如果有少量的細胞核著色屬于正常情況；如果出現大量的細胞核著色，往往和標本固定時間過長有關，應重新處理標本。

關注DNA片段化試劑，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產品：


BTN131033 小鼠基因組DNA 100μg
ZN0067 Annexin III mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0078 APLP1 mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0111 Axin1 mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0156 BSEP mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0163 C-MOS mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0293 CK1 mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0304 COL10A1 mRNA原位雜交試劑盒 100T

如果您覺得“WH0207 DNA片段化試劑”描述資料不夠齊全，請聯系我們獲取詳細資料。(聯系時請告訴我從給覽網看到的，我們將給您最大優惠！)
本頁鏈接：http://www.lgsztm.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8581138.html
已經有1344位訪客查看了本頁.