RNase H由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，我公司的RNase H品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括RNase H在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：RNase H
英文名稱：Ribonuclease H
產品貨號：YT511
產品規格：100U

本酶是一種核糖核酸內切酶，可以特異性地水解DNA-RNA雜合鏈中的RNA。RNase H不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵，即不能消化單鏈或雙鏈DNA或RNA。

特點：特異性消化DNA-RNA雜合鏈中的RNA，常用于cDNA第二鏈的合成。
用途：DNA-RNA雜合鏈中去除RNA，例如cDNA第二條鏈合成前去除mRNA；通過互補的DNA序列實現對RNA的定點剪切；除去雜交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；體外多腺苷酸化反應(polyadenylation reaction)產物研究。
來源：E.coli MRE-600細胞。
分子量：約18.4kDa(單體)。
活性定義：37℃20分鐘內，能夠催化1nmol雜合雙鏈中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定義為1個活性單位。
活性檢測條件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl2，1mM DTT，24μM[3H]-poly(A).poly(dT)，0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。
純度：不含DNA內切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
酶儲存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl2，10mM DTT。
失活或抑制：65℃加熱10分鐘可使RNase H失活。金屬離子螯合劑和巰基封閉劑均能抑制RNase H活性。
儲存條件：-20℃。

使用說明：

1. DNA-RNA雜合鏈中去除RNA：
a. 用反轉錄酶，例如RT M-MuLV反轉錄酶或RT M-MuLV反轉錄酶(RNase H-)合成cDNA條鏈，70℃孵育10分鐘終止反應。
b. 在冰浴上向已經合成條鏈的20μl反應體系中依次加入如下試劑：
Reaction Buffer (10X)————2μl
無核酸酶去離子水——————217.8μl
RNase H (5U/μl)——————20.2μl
c. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用 Vortex在zuì低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
d. 37℃孵育1小時。
e. 加入2.5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混勻，以終止反應。
f. 后續可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法純化合成的雙鏈cDNA，也可以使用適當的DNA純化試劑盒進行純化。DNA純化試劑盒(YT009)可以向百奧萊博訂購。
說明：其他情況DNA-RNA雜合鏈中去除RNA的條件可以參考上述條件進行。RNase H反應的pH范圍約在7.5-8.3均可。

2. 雜合鏈中RNA的去除和cDNA第二鏈的合成：
a. 用反轉錄酶，例如RT M-MuLV反轉錄酶(YT392)、RT M-MuLV反轉錄酶(RNase H-)(YT393)或cDNA 鏈合成試劑盒(RNase H-)(YT395)合成cDNA條鏈，70℃孵育10分鐘終止反應。
b. 在冰浴上向已經合成條鏈的20μl反應體系中依次加入如下試劑：
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I————8μl
無核酸酶去離子水—————————————————68.8μl
RNase H (5U/μl)—————————————————0.2μl
DNA Polymerase I, E.coli—————————————3μl (30U)
c. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用 Vortex在zuì低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
d. 15℃孵育2小時。(注意：反應溫度不能超過15℃)
e. 加入5μl 0.5M EDTA(pH 8.0)混勻，以終止反應。
f. 后續可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法純化合成的雙鏈cDNA，也可以使用適當的DNA純化試劑盒進行純化。DNA純化試劑盒(YT009)可以向百奧萊博訂購。
注：Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl2，10mM DTT。

3. 其他用途請參考上述用途或相關文獻資料進行。

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貨號	名稱	規格
BTN131196	Therminator II DNA聚合酶	100U
BTN120510	ATP依賴的DNase	200U
YT392	M-MuLV反轉錄酶(逆轉錄酶)	2000U
SV0005	Acc65I限制性內切酶	10KU|2KU|1KU
SV0055	ApoI限制性內切酶	5KU|1KU|500U
SV0103	BbvCI限制性內切酶	500U|100U
SV0105	BbvI限制性內切酶	1500U|300U|150U

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名稱：DNase I溶液
貨號：BTN130984
規格：1.5mL
本產品是DNase I的10mg/mL的溶液，酶活性為1500-2500U/mg。DNase I從牛胰腺純化得到是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內切酶，分子量約32kDa(單體)。DNase I水解單鏈或雙鏈DNA后的產物，5′端為磷酸基團，3′端為羥基。其活性依賴于鈣離子，并能被鎂離子或二價錳離子激活。鎂離子存在條件下，DNase I可隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；二價錳離子存在條件下，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個核苷酸突出的粘末端。

產品特點：
1．即開即用，不需要用戶單獨配置。
2．可用于制備RNase-free的DNase。本產品為粗制品，可能含殘留的RNase，不能直接用于清除RNA樣品中的DNA。
3．本產品可直接用于DNase I Footprinting實驗、缺口平移(Nick Translation)、制備DNA隨機片斷文庫、制備TUNEL檢測中的陽性對照。

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
本產品可用于DNase I Footprinting實驗、缺口平移(Nick Translation)、制備DNA隨機片斷文庫、TUNEL檢測中剪切基因組DNA作為陽性對照。具體使用方法請參考相關資料。

注意：本產品濃度較高，如需對其進行稀釋，需要自備DNase I儲存液。

DNase I儲存液的配方：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl?，50%(v/v)甘油。

附錄：
1．DNase I活性定義：37℃10分鐘內，將能夠完全降解1μg pBR322質粒DNA所需的酶量定義為1個活性單位。
2．DNase I活性檢測條件：40mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgSO4，1mM CaCl2，1μg of pBR322 DNA。
3．純度：不含其它DNA內切酶和外切酶。
4．DNase I酶儲存溶液：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v)甘油。
5．DNase I酶反應液(10×)：100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，25mM MgCl2，1mM CaCl2。
6．失活或抑制：加入EDTA至終濃度為2.5mM后，65℃加熱10分鐘可使DNase I失活。酚lǜ仿抽提也可以使DNase I失活。金屬離子螯合劑，達到毫摩爾/升濃度的鋅離子、0.1%的SDS、DTT、巰基乙醇等還原劑，50-100mM以上鹽濃度均對DNase I有顯著抑制作用。

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