北京百奧萊博供應(yīng)的Taq Plus DNA聚合酶用于科研試驗(yàn)，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多Taq Plus DNA聚合酶等核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢訂購(gòu)。...

特別提示：包括Taq Plus DNA聚合酶在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Taq Plus DNA聚合酶
英文名稱：Taq Plus DNA Polymerase
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0069
產(chǎn)品規(guī)格：250U|500U

本制品是Taq和Pfu DNA聚合酶的混合物，有5′-3′外切核酸酶活性和3′-5′外切酶活性。Taq Plus具備擴(kuò)增效率高，錯(cuò)配率低的特點(diǎn)。與Taq DNA聚合酶相比，具有擴(kuò)增長(zhǎng)度增加（簡(jiǎn)單模板可有效擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)20 kb，對(duì)復(fù)雜模板也可達(dá)10 kb）、保真度好等優(yōu)點(diǎn)；與Pfu DNA聚合酶比較，具有擴(kuò)增速度快，反應(yīng)效率高的。PCR產(chǎn)物可直接進(jìn)行T/A載體克隆，如需提高克隆效率，建議先純化，加A后再進(jìn)行T/A載體克隆。用于從復(fù)雜模板中如基因組等擴(kuò)增高保真產(chǎn)物，如表達(dá)基因的克隆、基因的定點(diǎn)突變和細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變的分析（SNP）等。

產(chǎn)品組成：

組分	WH0069-1	WH0069-2
Taq Plus DNA Polymerase	250U	500 U
10×Taq Plus Buffer	1.8ml	1.8ml

10×Taq Plus Buffer
200mM Tris-HCl （pH 9.0);200mM KCl;100mM （NH4)2SO4;15 mM MgCl2;其它成分。
10×Taq Plus Buffer分為含Mg2+和不含Mg2+兩種，可自選。不含Mg2+的Buffer，另外配有25 mM MgCl2。如果沒(méi)有特別，通常提供的為含有Mg2+的Buffer。

儲(chǔ)存條件：-20℃保存

活性定義：
1單位（U）HotMaster Taq DNA polymerase活力定義為在74℃、30min內(nèi)，以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，將10nmol的脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。

質(zhì)量控制：
SDS-PAGE檢測(cè)純度大于99%；經(jīng)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶活性；能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因；室溫存放一周，無(wú)明顯活性改變。

使用舉例：
注意：以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)系統(tǒng)，僅供參考。實(shí)際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異，需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物長(zhǎng)短等具體情況，設(shè)定zuì佳反應(yīng)條件。以人基因組DNA為模板，擴(kuò)增1 kb的片段
1．PCR反應(yīng)體系的建立，50μl體系如下（可根據(jù)比例放大或縮小體系)：

組份	體積
Template	＜1μg
Primer 1（10μM)	1 μl
Primer 2（10μM)	1 μl
10×Taq Plus Buffer	5 μl
dNTP Mixture（2.5 mM)	4 μl
Taq Plus（2.5 U/μl)	0.5-1 μl
ddH2O	補(bǔ)至50μl

2．PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置：
  
3．結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取5 μl反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

根據(jù)您的關(guān)注的Taq Plus DNA聚合酶，Taq酶&Pfu酶，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：PCR抑制物清除劑
貨號(hào)：BTN60804
規(guī)格：1mL
用血液、土壤、植物、中藥材等樣品中提取的DNA 經(jīng)常含有會(huì)抑制PCR的產(chǎn)物。本產(chǎn)品專門用于解除這些PCR 抑制劑的抑制作用，使DNA 能夠用于PCR擴(kuò)增。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 使用簡(jiǎn)單，直接加入PCR反應(yīng)體系中使用。
2.適用范圍廣，可以用于解除血液、土壤、植物、中藥材等DNA樣品中的PCR 抑制劑。

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：將本產(chǎn)品按1：10的比例加入到PCR反應(yīng)體系中即可進(jìn)行PCR，如果PCR反應(yīng)體系為50μL，則需要加本產(chǎn)品5μL。

名稱：通用型RT-LAMP恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒
貨號(hào)：BTN101114
規(guī)格：50次
本試劑盒可以用于RT-LAMP等溫?cái)U(kuò)增，RT-LAMP即逆轉(zhuǎn)錄和Loop-Mediated Isothermal Amplification(環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增)的結(jié)合，專門用于快速擴(kuò)增RNA。LAMP是2000年才出現(xiàn)的一種新穎的等溫核酸擴(kuò)增方法。它利用4或6條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的DNA聚合酶，在等溫條件下(63℃左右)30－60分鐘完成擴(kuò)增。該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測(cè)范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于RT-PCR技術(shù)，同時(shí)還不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等過(guò)程，不依賴任何專門的儀器設(shè)備。目前已成功應(yīng)用于人類及動(dòng)植物、細(xì)菌、病毒、寄生蟲、真菌等病原體的快速檢測(cè)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.高特異性，由于同時(shí)使用4-6條特異引物，所以特異性比RT-PCR更高。
2.高擴(kuò)增效率，擴(kuò)增效率可達(dá)到10E9-10E10，比PCR靈敏一個(gè)數(shù)量級(jí)，可檢測(cè)到單拷貝的RNA分子
3. 65℃左右完成RT和LAMP擴(kuò)增，不需要貴重的熱循環(huán)儀。
4. 即開即用，包含了除引物和模板RNA外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果，不需要昂貴的電泳、熒光PCR等儀器。
6. 提供擴(kuò)增對(duì)照，便于在遇到困難時(shí)分析原因。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
RT-LAMP Mix(2×)	0.5ml
AMV-Bst混合液	75μl
對(duì)照引物混合物	40μl
對(duì)照模板	5μl
MgCl2(25mM)	0.2ml
RNase-free水	1ml
說(shuō)明書	1份

注：RT-LAMP Mix(2×)稀釋到1×?xí)r，已經(jīng)有8mM Mg2+，本試劑盒提供的MgCl2(25mM)用于用戶優(yōu)化條件用。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在冰上溶解除酶外的各種組份，混勻，稍離心。在反應(yīng)管中加入以下組份：

成份	樣品管	陰性對(duì)照
RT-LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
自備FIP引物終濃度	0.8μM	0.8μM
自備BIP引物終濃度	0.8μM	0.8μM
自備F3引物終濃度	0.2μM	0.2μM
自備B3引物終濃度	0.2μM	0.2μM
自備Loop F引物終濃度(可選項(xiàng))	0.4μM	0.4μM
自備Loop B引物終濃度(可選項(xiàng))	0.4μM	0.4μM
自備模板 RNA	1-100ng	不加
AMV-Bst 混合液	1.5μl	1.5μl
補(bǔ)水到	20μl	20μl

 注：如在反應(yīng)管中加入本公司PCR級(jí)綠如藍(lán)染料1μL(水則少加1μL)，則可直接在熒光定量PCR儀中進(jìn)行熒光定量檢測(cè)。
2. 混勻，置于60-65℃保溫30-120分鐘。注意：如果不使用Loop引物，則zuì好保溫120分鐘；如果使用Loop引物，則zuì好保溫30分鐘。
3. 80℃10分鐘滅活Bst DNA聚合酶。此酶有外切酶活性，所以必須滅活。
4.產(chǎn)物置于-20℃?zhèn)溆没蛄⒓从糜谙掠螜z測(cè)。擴(kuò)增產(chǎn)物可選下列方法之一檢測(cè):
a)瓊脂糖凝膠電泳。取擴(kuò)增產(chǎn)物5μL，1-2%的瓊脂糖凝膠電泳，可見LAMP特征性電泳圖譜；
b)向擴(kuò)增產(chǎn)物中直接加入本公司PCR級(jí)綠如藍(lán)染料(另售)1μL，混勻，稍離心。將反應(yīng)管置于紫外透射儀或凝膠成像系統(tǒng)中，紫外燈下可見綠色熒光產(chǎn)生；
c)熒光定量檢測(cè)。
5. 結(jié)果分析：
a)如果沒(méi)有擴(kuò)增，則需要用本試劑提供的陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行擴(kuò)增。本試劑盒提供陽(yáng)性對(duì)照，反應(yīng)按下表設(shè)置：

成份	陽(yáng)性對(duì)照管
RT-LAMP Mix(2×)	10μl
對(duì)照引物混合物	4.0μl
對(duì)照模板	1μl
AMV-Bst 混合液	1.5μl
水	3.5μl

 混勻后，置于60℃保溫120分鐘，其余操作同上。注意：本對(duì)照引物中沒(méi)有Loop引物，所以zuì好保溫120分鐘。
b)如果陽(yáng)性對(duì)照能夠擴(kuò)增出，則說(shuō)明試劑盒沒(méi)有問(wèn)題，可能是模板或引物的問(wèn)題。如果陽(yáng)性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增出條帶，則是試劑盒的問(wèn)題，請(qǐng)跟廠家聯(lián)系。

注意事項(xiàng)：
1.引物設(shè)計(jì)對(duì)成功擴(kuò)增十分關(guān)鍵。除用于SNP分型外，盡量以保守區(qū)設(shè)計(jì)引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入環(huán)狀引物F loop/B loop可以使反應(yīng)速度大大提高。
3. 應(yīng)優(yōu)化引物序列、GC含量和盡量避免二級(jí)結(jié)構(gòu)。
4.反應(yīng)中各個(gè)引物的濃度及比例對(duì)擴(kuò)增效果有一定的影響。
5. 建議先將所有引物混合在一起，配制成10.濃度以方便使用。
6. LAMP擴(kuò)增具有特異性好、靈敏度高、時(shí)間快、不需要特殊儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)。但太高的靈敏度使得其比普通PCR擴(kuò)增更加容易污染導(dǎo)致假陽(yáng)性。因此，必須高度重視擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。常規(guī)措施包括嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)分區(qū)、添加UNG和dUTP(可能導(dǎo)致反應(yīng)效率下降)、使用熒光定量等不開蓋檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)室一旦遭到污染，所有相關(guān)試劑必須全部更換，必要時(shí)還得更換實(shí)驗(yàn)室。
7. 要確證擴(kuò)增的為目標(biāo)基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern雜交。
8. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床治療、食品等用途。

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