BJ5183-AD-1化學感受態是高品質的克隆與表達產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于生化實驗研究等領域，我公司的BJ5183-AD-1化學感受態品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括BJ5183-AD-1化學感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：BJ5183-AD-1化學感受態細胞
英文名稱：BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell
產品貨號：MQ0020
產品規格：10×100μl/50×100μl

BJ5183-AD-1是攜帶了腺病毒質粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株，是目前腺病毒系統zuì常用的感受態細胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC雙重突變，賦予BJ5183細胞較強的重組能力，有利于轉入的目的基因與腺病毒骨架質粒的重組。endA1(缺失核酸內切酶)的突變有利于重組DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株細胞中已經提前轉入了腺病毒質粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome(E1/E3 deleted)]，賦予該菌株氨芐抗性，在病毒質粒構建時，只需轉入線性化的目的質粒即可，簡化了實驗步驟，提高了病毒質粒重組概率。Strr賦予BJ5183-AD-1菌株鏈霉素抗性。BJ5183-AD-1感受態細胞經特殊工藝制作，pCAMBIA2301質粒(size:1163bp)檢測轉化效率>1×105cfu/μg DNA。
保存條件：-80℃
基因型：
endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR(Strr)[pAdEasy-1(Ampr)]
操作說明：
1.BJ5183-AD-1感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質粒(含有目標基因并線性化)，并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基(2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4.5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
注意事項：
1.感受態細胞zuì好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2.混入目的DNA時應輕柔操作。
3.BJ5183-AD-1菌株的質粒產量不高。腺病毒構建成功后，可選擇在其他大腸桿菌菌株中擴繁，純化質粒。
4.BJ5183-AD-1感受態細胞對溫度敏感，應儲存在-80℃超低溫冰箱，避免溫度波動，溫度波動會降低感受態轉化效率。

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規格：10*100μl
 本產品是采用大腸桿菌JM110菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測本產品，轉化效率可達106。本產品為dam-，dcm-的菌株，排除dam，dcm甲基化的影響。
 菌株基因型為：dam dcm supE44 hsdR17 thi leu rpsLlacY galK galT ara tonAthrtscΔ(lac-proAB)F-[traD36 proAB+ lacIq cZΔM15]

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養基等。

使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μL，根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA 所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB 固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。

注意事項：
1. 涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA 總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA 總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm，2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2. 新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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