豬源性成分單重熒光PCR檢測試劑由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研目的，本品質量穩定，價位合理，需要豬源性成分單重熒光PCR檢測試劑等物種PCR檢測試劑盒產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括豬源性成分單重熒光PCR檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：豬源性成分單重熒光PCR檢測試劑盒
產品貨號：SYA294
產品規格：48次/盒

一、簡介：
本試劑盒用一對豬源性成分特異性引物，結合一條特異性熒光探針，用熒光PCR技術對豬源性成分DNA進行體外擴增檢測。本試劑盒中豬源性成分的探針報告基團為FAM。

二、用途：
該試劑盒適合于各種飼料及其它樣品中豬源性成分的檢測。

三、試劑盒組成：(40T/Kit)
組份 數量 規格
豬物種熒光qPCR反應液(Pork-qPCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
陽性對照(Pork-PTC) 1管 50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Bio-Rad系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品采集與DNA提取
6.1 樣品采集
樣品的采集與預培養按照樣品的采集按照標準《飼料中牛羊源性成分的定性檢測定性聚合酶鏈式反應(PCR)法》(GB/T 20190-2006)要求進行。
6.2 DNA提取
可按常規方法提取，也可采用商品化試劑盒提取DNA。
6.2.1 動物組織、食品或飼料：直接取約50mg上述材料，勻漿后置入潔凈的1.5mL離心管中，加50μl DNA抽提液充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃15min，4℃降溫5min，13000rpm離心5min，取上清液5μL進行PCR反應。
6.2.2 血液：取500μL搖勻的抗凝血轉至一潔凈的1.5mL離心管中，加入1mL雙蒸水，劇烈震蕩30s，8000rpm離心5min，棄上清。重復清洗至無明顯紅色沉淀。加入1mL生理鹽水，劇烈震蕩15s，10000rpm離心5min，棄上清。沉淀加50μl DNA抽提液并與沉淀混勻，100℃恒溫15min，4℃降溫5min。13000rpm離心5min，取上清5μL進行PCR反應。
 注：陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區域加入陽性對照。

七、檢測步驟
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(Pork-qPCR MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 15μL N×15μL
向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(Pork-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM

八、結果分析：
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
(1)陰性對照(NTC)：不應產生任何的擴增曲線。
(2)陽性對照(Pork-PTC)：均產生擴增曲線。
(3)以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
(1)在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明豬源性成分核酸陽性。
(2)Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明豬源性成分核酸陰性。
(3)如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
(4)對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行豬源性成分qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線，判為樣本陽性，表明豬源性成分核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
(1)初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
(2)所有使用的離心管應高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
(3)PCR操作應嚴格按照要求分區(試劑配制區、標本處理區、PCR擴增區等)，防止實驗室污染。
(4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區的超凈工作臺進行，以免污染。
(5)試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。


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