北京百奧萊博供應的Ni瓊脂糖凝膠用于科學研究，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多Ni瓊脂糖凝膠等蛋白質研究產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括Ni瓊脂糖凝膠在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：Ni瓊脂糖凝膠
英文名稱：Ni-Agarose Resin
產品貨號：WE0272
產品規格：10ml

  該鎳柱純化系統對6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力，能夠一步純化帶有6個組氨酸親和標簽的蛋白。該系統具有4個Ni2+螯合位點，較只有3個螯合位點的Ni-IDA結合Ni2+更為牢固，有效防止純化過程中Ni2+脫落且增強對His標簽蛋白的結合能力，提高純化效率。較高的基團密度，大大提高了蛋白載量。該系統在天然或變性條件下，對來源于各種表達系統(如桿狀病毒，哺乳細胞，酵母以及細菌)中的His標簽蛋白，均有很好的純化效果。本產品已螯合鎳離子，可直接使用，方便，快捷。

支持物：CL-6B瓊脂糖凝膠
載量：20-30 mg His標簽蛋白/ml填料
粒徑：50-160μM

注意事項：
1、緩沖液中不建議使用 β-巰基乙醇、DTT或EDTA。
2、整個純化過程中切忌凝膠脫水變干。
3、為提高純化效率，先確定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的zuì佳使用濃度。可以使用線性或梯度濃度的咪唑(20-500 mM)洗脫蛋白，并通過SDS-PAGE或Western Blotting來檢測目的蛋白的純度。
4、為避免柱子被堵塞，請使用高純度的試劑配制緩沖液，并通過0.45μM過濾器過濾。建議將裂解液進行離心，或者使用0.45μM過濾器過濾。
5、柱再生時，保證每步洗完后都要用足夠的去離子水沖洗至中性。

使用方法：

I 緩沖液的準備
1、可溶性蛋白純化緩沖液配方：

成分	Tris-HCl(PH 7.9)	咪唑	氯化鈉
Soluble Binding Buffer	20 mM	10 mM	0.5 M
Soluble Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M

2、包涵體蛋白純化緩沖液配方：

成分	Tris-HCl(PH 7.9)	咪唑	氯化鈉	尿素/鹽酸胍
Inclusion Body Binding Buffer	20 mM	5 mM	0.5 M	8 M/6 M
Inclusion Body Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M	8 M/6 M

II 組裝層析柱
1、將Ni-Agarose Resin填料混勻后加入層析柱，室溫靜置10分鐘，待凝膠與溶液分層后，把底部的出液口打開，讓乙醇通過重力作用緩慢流出。
注意：
1)填料的上層是乙醇保護層，將填料和乙醇一起混勻，以每ml填料純化20-30mg His標簽蛋白計算，取需要的填料與乙醇的混合液加入層析柱。
2)本實驗是通過重力作用使溶液流出，如果溶液不流出，可以給柱子一個外力，例如用大拇指對柱口輕輕按壓一下，迫使其流出。
2、向裝填好的柱中加入5倍柱體積的去離子水將乙醇沖洗干凈后，再用10倍柱體積的Binding Buffer平衡柱子，平衡結束后即可上樣。
注意：柱體積指的是填料的體積。

III 可溶性蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入1-5ml細菌裂解液，超聲裂解菌體。10000×g離心10分鐘后，收集上清。
2、將上清液過柱，流速為10倍柱體積/小時。
3、使用15倍柱體積的Soluble Binding Buffer沖洗柱子，收集流穿峰。
4、使用5倍柱體積的Soluble Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
5、洗脫后，依次使用3倍柱體積的Soluble Binding Buffer和5倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。

Ⅳ 包涵體蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入1-5ml 細菌裂解液，超聲裂解菌體。
2、離心，棄上清，將沉淀重懸于Soluble Binding Buffer 中(如有需要，可進行超聲波處理，超聲前可加入1-5 mM 磷酸酶抑制劑混合物)。
3、重復操作2，直至包涵體清洗干凈(呈較潔凈的乳白色狀)。
4、將沉淀重懸于Inclusion Body Binding Buffer中，冰浴1小時，使包涵體溶解。
5、10000×g離心20分鐘，將上清以孔徑為0.45μM的濾膜過濾。
6、將蛋白溶液負載上柱，流速為10倍柱體積/小時。
7、使用15倍柱體積的Inclusion Body Binding Buffer沖洗柱子，收集流穿峰。
8、使用5倍柱體積的Inclusion Body Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
9、洗脫后，依次使用3倍柱體積的Inclusion Body Binding Buffer和5倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。
注意：在純化包涵體蛋白時，所有緩沖液均含有變性劑，需要降低Binding Buffer中的咪唑濃度(5 mM或更低)。洗脫時，若蛋白在較高pH下洗脫失敗，可以選用低pH緩沖液作為洗脫緩沖液(pH6.5，pH5.9或pH4.5)。

Ⅴ 柱再生
當填料使用多次后，結合效率會有所下降(表現為流速變慢或填料失去藍綠色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用壽命和蛋白質的結合效率。
1、使用2倍柱體積的6M鹽酸胍沖洗后，使用3倍柱體積的去離子水沖洗。
2、使用1倍柱體積2% SDS沖洗。
3、依次使用1倍柱體積的25%、50%、75%和5倍柱體積乙醇沖洗，再依次使用1倍柱體積的75%、50%、25%的乙醇沖洗。
4、使用1倍柱體積的去離子水沖洗。
5、使用5倍柱體積含50 mM EDTA緩沖液(PH8.0)沖洗。
6、使用3倍柱體積去離子水，3倍柱體積20%乙醇沖洗。
7、封柱后2～8℃保存。
8、再次使用前，需先使用10倍柱體積去離子水沖洗，然后使用5個柱體積的50 mM NiSO4再生，3個柱體積的Binding Buffer平衡。

儲存條件：2～8℃，避免冷凍

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貨號	名稱	規格
BTN140652	30mL親和層析柱	30mL
BTN131045	辛甲基硫吡喃葡萄糖苷(OTG)	5g
BTN81212B	一站式蛋白質非變性PAGE電泳套裝(中pH)	30次
BTN100214	預混型BCIP/NBT溶液	250mL
YT044	組織線粒體純化試劑盒	50-100次
WE0288	SDS-PAGE上樣緩沖液(還原，5×)	5×2ml
SNM438	PVDF膜(0.45μm)	15cm×20cm

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名稱：蛋白marker(3.3～20.1kD)
貨號：BTN70102A
規格：15次
本產品為蛋白質電泳標準系列，為已知的標準蛋白質混合物，在SDS-PAGE時可以作為分子量標準，估計其他蛋白質的分子量大小。

產品特點：
1．簡單，不需要自己單獨購買各種蛋白質配置。
2．本產品有粉末型和溶液型兩種，十分穩定。
3．本系列三種產品涵蓋從 3.3 KD-200 KD的分子量范圍。

所含成分及其分子量		A型	B型	C型
肌球蛋白重鏈	200.0KD			有
鈣調素結合蛋白	130.0KD			有
兔磷酸化酶B	97.4KD		有	有
牛血清白蛋白	66.2KD		有	有
兔肌動蛋白	43.0KD		有	有
牛碳酸酐酶	31.0KD		有
人生長激素	22.0KD
大豆胰蛋白酶抑制劑A	20.1 KD	有	有
雞蛋清溶菌酶	14.4KD	有	有
人工合成肽1	7,823D	有
人工合成肽2	5,856D	有
人工合成肽3	3,313D	有

產品組成：

成分	A型	B型	C型
蛋白分子量標準A型(低分子量)	15T	-	-
蛋白分子量標準B型(中分子量)	-	20T	-
蛋白分子量標準C型(高分子量)	-	-	10T
1×SDS-PAGE上樣液	0.5ml	0.5ml	0.5ml
說明書	1份	1份	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期兩年。

使用方法：

一、干粉型的使用：
1．開封后將1×SDS-PAGE上樣液加入到樣品管中溶解蛋白質粉末，各分子量標準所需的1×SDS-PAGE上樣液的體積如下:
低分子量標準(BTN70102A)需要150μL。
中分子量標準(BTN70102B)需要200μL。
高分子量標準(BTN70102C)需要100μL。
2．沸水浴中加熱 5分鐘。
3．短暫離心后將溶液按每管10μL的體積分裝到多個塑料離心管中，置-20℃長期保存。
4．使用時每次取一管，室溫放置直到液體融化后，沸水浴中加熱3～5分鐘，即可上樣進行SDS-PAGE電泳。BTN70102A型推薦使用Tricine-甘油SDS-PAGE膠、BTN70102B 推薦使用12%的分離膠、BTN70102C 推薦使用8%的分離膠。
5．電泳后進行考馬斯亮藍G-250染色，染色后出現的帶型見上表。

二、溶液型的使用：
1．將溶液按每管一次電泳的用量分裝到塑料離心管中凍存，每次只用一管，這樣避免反復凍融。
2．使用時取一管室溫放置直到液體融化。
3．沸水浴中加熱3～5分鐘后趁熱上樣并進行SDS-PAGE電泳。BTN70102A型推薦使用Tricine-甘油SDS-PAGE膠、BTN70102B 推薦使用12%的分離膠、BTN70102C 推薦使用8%的分離膠。
4．電泳后進行考馬斯亮藍G-250染色，染色后出現的帶型見上表。

疑難解答：
1.分子量不同，SDS-PAGE的分離膠和濃縮膠濃度不同。需要自己根據具體情況調整。
2.電泳之后可將膠進行染色觀察，如果使用傳統配方進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的一步式藍色PAGE染液(BTN61204)，該產品具有染色快，，靈敏性高等物點，是常規蛋白染色液的替代品。

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