ATP依賴的DNase的品牌是百奧萊博，是優質的工具酶產品，本制品用于生化實驗研究等領域，本品質量穩定，價位合理，需要ATP依賴的DNase等工具酶產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括ATP依賴的DNase在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：ATP依賴的DNase
英文名稱：ATP Dependent Dnase
產品貨號：BTN120510
產品規格：200U

在含有ATP的Buffer反應體系中，本產品能夠特異性地水解線性雙鏈DNA產生脫氧核糖核酸，但對環狀雙鏈DNA不起作用。本產品可用于除去質粒或粘粒等環狀DNA樣品中殘留的少量線性基因組DNA片段的污染，減少對后續實驗的影響。在基因工程實驗中，制備的質粒和粘粒，即使是通過氯化銫/溴乙錠梯度離心方法或其它嚴格的方法制備，也常含有堿裂解操作過程中帶來的少量細菌基因組DNA片段的污染，尤其在制備低拷貝克隆載體的質粒或粘粒等時，這種現象更為明顯，使用本產品即可以有效的去除這些污染。

產品特點：
1．使用本制品可以有效除去樣品中的基因組DNA，然后通過70℃、5 min的加熱處理即可使酶完全失活，從而減少基因組污染物對質粒或粘粒等的常規分析、亞克隆和序列測定等后續實驗結果的影響。
2．此產品可用于低拷貝的質粒或粘粒的提取及除去質粒等環狀DNA中線性基因組DNA污染物。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

活性定義：以線性化的pMD18 DNA為底物，在1mM ATP存在、pH9.4緩沖液中，37℃反應30分鐘，催化生成1nmol脫氧核苷酸所需要的酶量，定義為1活性單位。在10μL反應體系中，加入本產品0.2 U，10×ATP依賴的DNA酶Buffer 1μL，0.2μg的線性化的pMD18 DNA，在37℃條件下反應30分鐘，能夠使線性化的pMD18 DNA產生95%以上的降解作用。

使用方法：
使用本產品除去 pUC18質粒中含有的大腸桿菌基因組DNA片段污染物(占60%)，可以提高陽性克隆的比率。

1．在微量離心管中配制下列反應液：

成分	樣品	對照
10×反應Buffer	1μL	1μL
pUC18質粒DNA混合物	1μg	1μg
ATP依賴的DNA酶	2U	-
dH2O	Up to 10μL	Up to 10μL

2．37℃反應2小時。長時間反應效率有下降的傾向，建議反應時間1～2小時。
3．70℃加熱5分鐘，使ATP依賴的DNA酶失活。
4．在微量離心管中制備下列酶切反應液：

成分	用量
10×H Buffer(客戶自備)	1μL
第3步反應液	5μL
EcoR I(客戶自備)	30U
dH2O	Up to 10μL

5．37℃反應1小時之后，進行60℃ 15 min反應，使EcoR I失活。
6．在微量離心管中制備下列連接反應液：

成分	用量
10×T4 DNA Ligase Buffer(客戶自備)	1μL
第5步酶切反應液	2μL
T4 DNA Ligase(客戶自備)	350 U
dH2O	Up to 10μL

7．16℃反應1小時。

取上述連接反應液2～10μL，轉化到JM109感受態細胞中，涂平板培養，進行藍白菌落篩選并計數。實驗結果表明，使用ATP依賴的DNA酶處理的pUC18質粒DNA混合物(含60％大腸桿菌基因組DNA片段)的自連結果中，白色菌落減少80%以上，有效抑制了大腸桿菌基因組DNA的污染。


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