B載體是高品質的克隆與表達產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于科學研究，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多B載體等克隆與表達產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括B載體在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：B載體
英文名稱：Magic Vector B
產品貨號：BTN51104
產品規格：2μg

本產品是專門用于快速克隆平末端DNA片段的專用載體,它是由Sma I酶切ClionG載體后經過純化得到的即用型線性載體。跟ClionG載體一樣，本產品帶有自殺基因，Sma I位點位于該基因之中，只有當外源平末端DNA 插入片段插入Sma I位點,連接后的DNA轉化的細胞才能生長,所以zuì后得到的轉化子幾乎都是含有平末端DNA 插入片段的重組子。

產品特點：
1. 即用性，可以直接用于連接反應，免去繁瑣的酶切，電泳檢測，純化，去磷酸化，再純化等步驟。
2. 具有Clion-G載體的所有優點，包括零背景,適用于所有E.Coli菌株,多拷貝的colEI型復制起始位點。
3.率，由于自殺基因的使用有效地減除了載體自身環化對平末端DNA 克隆的影響，自身環化得到的轉化子在有選擇液存在時只占總轉化子的1%-5%。
4. 應用廣泛，可用于克隆酶切產生的平末端DNA，Pfu酶擴增的PCR片段，cDNA片段，3′和5′RACE片段，Taq酶擴增的PCR片段(部分為平末端)。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期兩年。

自備試劑：
1.外源DNA片段。如果含又DNA片段的反應液中不含其他載體DNA(如酶切反應液，PCR反應液)，可以不需要凝膠回收,滅活酶后即可直接將反應液用于連接反應。PCR引物5′端一般為OH基團，zuì好在PCR后用T4 激酶磷酸化，否則連接效率低。
2.感受態宿主菌。DH5α，DH10B或HB101等常用E.coli菌株。
3.連接反應試劑。請購買現成試劑盒。
4. 選擇培養基。在倒LB 平板之前隨產品贈送的選擇液和Amp(如果附贈的選擇液含Amp,則不必須額外加Amp)按比例加入到LB 之中,使選擇液終濃度為1×，Amp 終濃度為50μg/mL(如果附贈的選擇液含Amp,稀釋到1X后Amp的終濃度即為50μg/mL),混勻后倒盤。

使用方法：

1.連接反應
a. 取新的經過滅菌處理的0.5mL Eppendorf 管,編號。
b. 將100 ng載體DNA轉移到無菌離心管中，加兩倍摩爾量的外源DNA片段，折合成重量(ng)=(外源DNA片段bp 數X 100 ng×2)/5330bp(載體DNA 長度)
c. 加蒸餾水至體積為8μl，于45℃保溫5分鐘，使重新退火的粘端解鏈。將混和物冷卻至0℃。平末端DNA片段的克隆可以省去45℃保溫5分鐘這一步。
d. 加入10×T4 DNA ligase buffer 1μl，T4 DNA ligase 0.5μl，混勻后用微量離心機將液體全部甩到管底，于16℃保溫1-24小時。
e. 同時做只有外源DNA片段沒有質粒載體的組對照反應。沒有必要做只有質粒載體而無外源DNA的對照組，因為自身環化的載體不能生長，能夠生長的轉化子基本上是兩個載體分子相互連接形成的新載體。但在有兩倍于外源DNA片段存在的情況下,兩個載體分子連接的機率很小。
2. E.coli感受態細胞的轉化
a. 各取每組連接反應液2μl按標準方法轉化E. coli感受態細胞。
b. 每組連接反應轉化原液取100μl用無菌玻棒均勻涂布于篩選培養基上，37℃下培養半小時以上,直至液體被完全吸收。

MCS位點：


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