YT015 紅色核酸染料

產品簡介
紅色核酸染料的品牌是百奧萊博,是優(yōu)質的核酸電泳和回收產品,本制品用于科研試驗,紅色核酸染料是我司眾多優(yōu)質核酸電泳和回收之一,質量堪比同類進口產品,價格非常優(yōu)惠,目前正熱烈促銷中,恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括紅色核酸染料(DNA染料)(RNA染料)在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產品名稱:紅色核酸染料(DNA染料)(RNA染料)
英文名稱:Nucleic Acid Red(2000X)
產品貨號:YT015
產品規(guī)格:1ml|5ml
本品是一種優(yōu)于溴化乙錠(EB)的核酸染料,用于凝膠中DNA、RNA等核酸的染色,可替代升級SYBR Green。本核酸紅染料具有安全(致突變性低且檢測不到顯著的細胞毒性)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,凝膠中的核酸在使用本產品染色后用適當紫外燈(300nm左右波長)檢測呈現紅色熒光,適用于原先使用EB為染料的凝膠成像系統(tǒng)。
本核酸紅染料比EB和SYBR Green更安全。本核酸紅染料在遠高于其工作濃度范圍時均沒有細胞毒性及誘變性。艾姆斯氏試驗(Ames test)結果表明,本核酸紅染料的誘變性遠小于EB。EB在多種致突變測試中呈現很強的誘變性,而本核酸紅染料僅僅在濃度高達20微克/毫升時,并在S9代謝活化時有非常微弱的誘變性。通常本核酸紅染料在凝膠中的工作濃度約為2微克/毫升,大大低于可導致誘變的濃度。本核酸紅染料和百奧萊博的另外一種安全型核酸染料核酸綠色染料(YT016),由于它們特殊的化學結構使其難以進入細胞,從而大大降低甚至避免了染料的致突變性和細胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透細胞膜,進入活細胞并染色DNA,并且有報道SYBR Green可以強烈增強紫外線誘導的基因突變。
本核酸紅染料檢測靈敏度高,對于小分子量核酸的染色效果好。本核酸紅染料的檢測靈敏度比EB高8-10倍,在檢測低濃度、微量DNA或RNA方面比EB更佳,尤其對小分子量的DNA檢測非常靈敏。在使用浸泡染色法時,本核酸紅染料和SYBR Gold的靈敏度相近甚至更高;與SYBR Gold不同的是,本核酸紅染料預先配制在凝膠中也有很高的靈敏度。EB對于小分子量核酸的染色效果差,而本核酸紅染料對于小分子量核酸的染色效果很好,便于觀察酶切或PCR獲得的小分子量核酸片段。推薦使用的本核酸紅染料濃度,其檢測效果略優(yōu)于EB。如果希望獲得更高的染色靈敏度,可以適當提高本核酸紅染料的工作濃度。
本核酸紅染料的穩(wěn)定性好,染色重復性高。含SYBR Green的凝膠核酸染色的重復性比較差,這通常是由于SYBR系列染料的穩(wěn)定性差導致的。而本核酸紅染料的穩(wěn)定性很好,可以室溫長時間保存及使用微波爐加熱。本核酸紅染料的光穩(wěn)定性良好,可以在室內正常光線下操作而無需避光。由于其熱穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性,含本核酸紅染料的凝膠在核酸染色時的重復性非常好。
本核酸紅染料可以使用和EB相同的檢測體系。本核酸紅染料和EB的激發(fā)光和發(fā)射光都非常接近,可以直接用本核酸紅染料替換EB,而不必更換已有的凝膠觀察、拍照或成像系統(tǒng)(約300nm激發(fā))。本核酸紅染料的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜請參考下圖。

本品核酸紅染料的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜
本品可以按適當比例直接加入瓊脂糖中配制成凝膠,也可以在電泳完畢后對凝膠進行染色。前者更加方便,而后者靈敏度要更高一些。但由于本品本身已經非常靈敏,通常采用把本品直接配制在凝膠中就可以了。對于一些特殊情況,如核酸樣品量特別少的情況等,則可以考慮電泳后再對凝膠進行染色。
本品對于核酸的遷移率影響非常小,小于SYBR Green對于核酸遷移率的影響。通過凝膠回收試劑盒(YT010)或酚氯fǎng抽提,可以有效去除與DNA或RNA結合的紅色染料,從而確保不會影響后續(xù)的連接、酶切、PCR、測序等常規(guī)的分子生物學用途。
儲存條件:室溫,避光,有效期一年。
注意事項:
1.本產品兼容常用的電泳緩沖液,例如TAE和TBE。
2.本品和EB一樣,作為熒光染料均需避光保存,但在使用過程中的常規(guī)室內光照不會影響其使用效果。
3.制備好的本品瓊脂糖凝膠,在4℃避光條件下通常可以保存3-5天。
4.本品瓊脂糖凝膠再次熔化使用時,為取得更好的觀察效果,需要添加適量本品。
5.電泳之后的凝膠不建議重復使用。
6.電泳后再使用本品染色的凝膠一般不需要脫色。如果發(fā)現背景太高,可以使用不含核酸酶的水進行脫色處理。
7.本品和核酸綠色染料(YT016)除了可以染色雙鏈DNA外,也可染色單鏈DNA和RNA。本品對單鏈核酸的染色靈敏度約為對雙鏈DNA染色靈敏度的一半。本品對單鏈核酸的染色靈敏度約為YT016的5倍。
8.如果使用聚丙烯酰胺凝膠,請使用浸泡染色法染膠,并延長染色時間至30分鐘-1小時。
9.如果觀察到條帶彌散或者分離不理想,建議使用浸泡染色法染色以確認是否與染料有關。如果浸泡染色法染色后仍然出現類似的問題,說明與染料無關,請嘗試以下方法:使用新鮮配制的電泳緩沖液、降低核酸的上樣量、降低染料的濃度、降低瓊脂糖濃度、選用更長的凝膠、降低電泳電壓一倍以上并延長凝膠電泳時間以改善電泳效果、使用更薄的梳齒等。
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名稱:一站式RNA電泳套裝
貨號:BTN60904
規(guī)格:10次
本品是包括瓊脂糖、去離子甲醛、RNA上樣液、電泳液等在內的RNA電泳套裝,專門用于RNA電泳分析。可以進行至少10次mini變性膠電泳。
產品特點:
1. 即開即用,用戶不需要自己進行RNase 滅活、高壓滅菌、pH調節(jié)等操作。
2.與Northern雜交等后續(xù)反應兼容。
產品組成:
| 成分 | 規(guī)格 |
| 瓊脂糖 | 5g |
| 超純水 | 250ml |
| 甲醛 | 60ml |
| RNAload(含EB) | 0.5ml |
| RNAep,10× | 100ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件:常溫運輸和保存,但收到貨后RNAload 需要4℃保存,RNAep,10×一旦打開需要-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
注意:所有器皿(三角瓶,電泳槽,槍頭等)均需去除RNase。強烈推薦使用本公司的的固相RNase 清除劑。
一、配制瓊脂糖甲醛變性膠(1.2%,100mL)
1.在三角瓶中加入下列成份:瓊脂糖 1.2-1.5g;DEPC水 87mL
2. 將瓊脂糖加熱融化后,加入10mL 10×RNAep(10×RNAep 就是10×MOPS緩沖液,其瓶子一旦打開,就很容易產生污染細菌,細菌大量繁殖后會釋放大量 RNase,所以剩下的10×RNAep zuì好-20℃放置)。
3. 待膠冷卻至 60℃左右,再加下列成份:甲醛 3.0mL;自備EB(10mg/mL)2-4μL
注意:由于本試劑盒提供的RNAload中含EB,所以也可以不加EB,但效果較差。如果使用自備的其他染料,如SYBR Green I,則不能同時使用其他染料,包括含EB的RNAload,用戶需要另購不含EB的RNAload)。
4. 混勻后倒膠,凝固半小時后即可以使用。
二、配制電泳液
5. 將RNAep 用DEPC 水稀釋十倍后即成電泳液,所需要的體積根據使用的電泳槽決定。
三、變性RNA樣品
6.在一干凈的離心管中將5-10μL RNA和15μL RNAload 混合,50-60℃保溫10分鐘后冰浴5-10分鐘,直接上樣。注意:每一泳道至多可分析30μg RNA,通常用10-20μg 總RNA進行Northern雜交,可以檢測高豐度mRNA(占mRNA 總量的0.1%以上);如待測RNA含量微,每個泳道需加0.5-3.0μg poly(A)+ RNA。
四、電泳
7.電泳時,將凝膠預電泳5 min(電壓為5 V/cm)。隨后加樣品和分子量對照(如果有的話),以3-4 V/cm的電壓電泳,直至染料遷移至膠下游的3/4處。
8.電泳結束后,在300nm 紫外燈下拍照。
五、后續(xù)處理
9. 按標準方法進行Northern雜交等后續(xù)處理。
使用效果:

圖注: 用本產品電泳兔全血總RNA效果圖。10μL 總RNA與15μL RNAload 混合后在甲醛瓊脂糖變性膠上電泳0.5小時,直接在紫外燈下觀察并照相。
疑難解答:
Q:RNA電泳為何zuì好使用RNAep,不要使用DNA電泳液TAE或TBE?
A:一是因為RNAep 經過去RNase處理,而一般實驗室使用的TAE或TBE都沒有經過去RNase處理,故有可能含RNase,使樣品RNA 降解。即使要滅活TAE或TBE中的RNase 也十分麻煩,因為DEPC 不能處理含Tirs的緩沖液;二是TEB含有硼酸,硼酸是研究多羥基醇和糖的經典試劑,它能與RNA中含多羥基的核糖反應生成糖硼酸絡合物,故電泳時RNA 帶型十分彌散。在一定濃度范圍內,RNA分子間還能通過硼酸形成分子間復合物,出現電泳時各種RNA以一條帶的形式出現的現象。所以RNA電泳時要避免使用含硼酸的緩沖液。使用TAE效果雖然比TBE 稍好,但文獻報道(BioTechniques 2000,28:414-415),它不能分離某些大小不同的RNA分子。
Q:上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組DNA 嗎?
A:不是。用TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳RNA時容易產生此現象,初步研究發(fā)現大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA通過堿基互補或通過硼酸絡合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復合物,加RNase處理后,這些紅色熒光物一般會消失。為避免此現象,建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠,也必須在上樣前使RNA變性。
使用百奧萊博優(yōu)化的上樣/變性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非變性膠上電泳時也有較好分辨率。使用非變性膠時,可以使用TAE或超快電泳液SuperBuffer-2,zuì好不要使用TBE緩沖液,因為TBE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復合物,RNA 很難形成銳利的條帶。
Q:如何確認和去處除污染的基因組DNA?
A:如果懷疑有DNA污染,可以用RNase處理RNA樣品,然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失,則表示是基因組DNA污染。進一步確認可以使用PCR擴增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除劑DNAScavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染,所以必須嚴格按照廠家提供的使用手冊進行操作。
Q:為何我的植物RNA樣品有4-5 條帶?
A:部分植物組織有葉綠體等質體,而葉綠體有核糖體,所以也有其rRNA。
葉綠體的rRNA跟細胞漿里面核糖體的rRNA大小不同,所以一般會多出兩條帶(共4 條rRNA 條帶)。小的tRNA和5S rRNA 有時可見,有時不可見,取決于回收效率。
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