MQ0050 Tuner化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

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特別提示:包括Tuner(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:Tuner(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱:Tuner(DE3)Chemically Competent Cell
產(chǎn)品貨號(hào):MQ0050
產(chǎn)品規(guī)格:10×100μl/50×100μl
Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因(半乳糖苷透性酶基因)突變株,此突變導(dǎo)致IPTG以均一速度進(jìn)入體系中大腸桿菌的每個(gè)細(xì)胞,產(chǎn)生更加嚴(yán)格、均一的濃度依賴。
此菌株用于表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如 pET系列)的基因。
λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶,該區(qū)整合于Tuner的染色體上,所以稱為Tuner(DE3),可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。
Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)107cfu/μg。
保存條件:-80℃
基因型:
F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm lacY1(DE3)
操作說(shuō)明:
1.取100μl冰上融化的Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。
4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
1.感受態(tài)細(xì)胞zuì好在冰上融化。
2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少zuì終用于涂板的菌量。
4.誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-40mM均可)。
5.為獲得需要量的蛋白,zuì佳誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。
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名稱:大腸桿菌Tuner(DE)plysS感受態(tài)細(xì)胞
貨號(hào):BTN130564
規(guī)格:0.1mL*10
Tuner(DE3)plysS是的Tuner(DE3)衍生菌株,為高度嚴(yán)緊表達(dá)宿主菌,用于毒性蛋白表達(dá),lac 透性酶突變,可以精細(xì)控制表達(dá)水平。抗性為氯霉素(34μg/ml)。
基因型:F–ompT hsdSB(rB– mB–)gal dcm lacY1(DE3)plysS(CmR)
儲(chǔ)存條件:干冰運(yùn)輸,-80℃保存,有效期6個(gè)月。
名稱:放線jūn酮
貨號(hào):BTN120688
規(guī)格:1mL
本品為濃度為100mg/mL放線jūn酮的甲醇溶液。放線jūn酮(Cycloheximide from microbial;CHX;Naramycin A),化學(xué)式C15H23NO4分子量281.35,外觀無(wú)色晶體熔點(diǎn)119.5-121℃。易溶于甲醇、乙醇和丙酮,微溶于水。放線jūn酮擁有非常強(qiáng)烈的毒性,包括損害DNA、導(dǎo)致畸形胎兒和其它對(duì)繁殖過(guò)程的效應(yīng)等,一般只用在體外研究中。放線jūn酮是一種在真核生物中對(duì)蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程有抑制效應(yīng)的化合物,它是灰色鏈霉菌(Streptomyces griseus)的一種產(chǎn)物。它通過(guò)干擾蛋白質(zhì)合成過(guò)程中的易位步驟而阻礙翻譯過(guò)程。在分子生物學(xué)中放線jūn酮可用來(lái)確定蛋白質(zhì)(酶)的半衰期;可作為植物生產(chǎn)調(diào)節(jié)劑;可用于篩選CHX抗性的酵母和真菌菌株。
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期6個(gè)月。
名稱:硫酸慶大霉素
貨號(hào):BTN120692
規(guī)格:2mL
本產(chǎn)品為濃度為15mg/mL的硫酸慶大霉素溶液。有效濃度為5μg/mL,在大于300μg/mL時(shí)具備細(xì)胞毒性,推薦使用終濃度:0.5-50μg/mL;WHO推薦在鼻咽拭子樣本處理中使用終濃度為10㎎/mL。硫酸慶大霉素又叫慶大霉素硫酸鹽,分子式:C21H43N5O7·H2SO4,分子量:575.67,CAS號(hào):1405-41-0。溶于水。
作用原理:慶大霉素靠結(jié)合到30S核糖體亞單位上引起密碼讀錯(cuò),阻斷肽酰-tRNA(peptidyltRNA)從受體位點(diǎn)到供體點(diǎn)點(diǎn)的轉(zhuǎn)移。慶大霉素對(duì)假單胞桿菌的殺菌效果靠結(jié)合到細(xì)胞膜的外膜部分,置換本來(lái)存在的陽(yáng)離子,使膜不穩(wěn)定,在細(xì)胞表面形成空洞。抗菌譜: 革蘭氏陰性細(xì)菌,葡萄狀球菌和其它的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸,-20℃避光保存,有效期6個(gè)月。
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