北京百奧萊博供應的2×富含GC PCR Maste用于生化實驗研究等領域，本品質量穩定，價位合理，需要2×富含GC PCR Maste等核酸擴增(PCR)產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括2×富含GC PCR MasterMix在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：2×富含GC PCR MasterMix
英文名稱：2×GC-rich PCR MasterMix
產品貨號：WE0116
產品規格：1ml

  本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR穩定劑和增強劑組成的預混體系，濃度為2×。預配好的PCR混合液使操作更加簡單快捷，可zuì大限度地減少人為誤差和污染。經過優化的緩沖液配方使酶的作用發揮zuì大功效，實現對復雜模板的高保真、率擴增，的MasterMix配方使整個反應體系非常穩定，重復性好。本品不含染料，PCR程序結束后可根據需要加入適量上樣緩沖液后進行電泳操作。擴增得到的PCR產物3"端附有一個“A”堿基，因此可直接用于T/A克隆。主要適用于對保真性要求較高的PCR反應和結構復雜的模板如GC含量高，有二級結構等的擴增，對簡單模板有效擴增的片段可達20kb，對復雜模板可達10kb。

產品組成：

組份	1ml
2×GC-Rich PCR MasterMix	1ml
ddH2O	1ml

注意：2×GC-Rich PCR MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

質量控制：
1、經檢驗無外源核酸酶活性；
2、PCR方法檢測無宿主殘余DNA；
3、能有效地擴增多種基因組中的單拷貝基因。

使用方法：
以下舉例為以人基因組DNA為模板，擴增1 kb的片段的PCR反應體系和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的改進和優化。

1、PCR反應體系

試劑	50μl反應體系	終濃度
2×GC-Rich PCR MasterMix	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物濃度請以終濃度0.1-1.0μM作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優化反應體系。

2、PCR反應條件

步驟	溫度	時間	循環數
預變性	94℃	2 min
變性	94℃	30 s	25-35 個循環
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
終延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優化反應條件。
2)延伸時間應根據所擴增片段大小設定，Bes Taq DNA Polymerase的擴增效率為2 kb/min。
3)可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以在保證產物得率的前提下應盡量減少循環次數。

儲存條件：-20℃，避免反復凍融。

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