我公司致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白，包括全基因組擴增試劑盒在內的各類受體、細胞因子、生長因子、轉錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特別提示：包括全基因組擴增試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：全基因組擴增試劑盒
產品貨號：JN0114
產品規格：10次

  全基因組擴增試劑盒基于多重鏈置換擴增的Phi29 DNA聚合酶等溫擴增體系，Phi29 DNA聚合酶是從Bacillus subtilis噬菌體Phi29中克隆出的嗜溫DNA聚合酶，利用基因重組技術，在大腸桿菌中進行表達后經多次純化分離而得。Phi29 DNA聚合酶具有很強的鏈置換活性，可實現對DNA復雜結構的解鏈與復制。同時具有的DNA合成能力，可連續合成多達70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很強的3’→5’外切酶活性，保真度高于大多數高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特別適合用于全基因組擴增。
  本試劑盒可以實現少量DNA樣本的全基因組無差別擴增，一個反應可以達到40ug的全基因組DNA。本試劑盒要求DNA樣品不能嚴重降解，以減少因模板量太少造成不平衡擴增。擴增產物可以稀釋后用于后續的DNA分析。

試劑盒組成：

組份	體積
10×BalbAmpBuffer	1ml
Primer mixture（1mM）	20ul
dNTPs（10mM）	200ul
100×BSA	100ul
BalbAmpPhi29 Enzyme	25ul
ddH2O	1ml

試劑盒特點：
1、高覆蓋度：經過擴增后可達到95%以上覆蓋度。
2、高均一度：無偏好擴增，可實現全基因組的均一擴增。
3、高保真：具有很強的校正功能，保真度高。
4、高靈敏：可實現少量樣本的全基因組擴增。

實驗方案：
1、配制以下反應體系：

試劑	體積
10×BalbAmp Buffer	5ul
Primer mixture（1mM）	1.25ul
模板	1ul
加ddH2O至	45ul

2、95℃預變性3min，然后冰上冷卻。
3、加入以下成分：

試劑	體積
dNTPs(各10mM)	2.5μl
100× BSA	0.5μl
BalbAmpPhi29 Enzyme

4、30℃反應3h或者過夜。
5、擴增產物是高濃度基因組DNA，需要將擴增產物用無菌水或者TE緩沖液進行稀釋后進行下游實驗。

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貨號	名稱	規格
YT395	cDNA鏈合成試劑盒(RNase H-)	10次
WE0102	2×Taq MasterMix(含染料)	1ml|5ml|25ml
WE0111	BaldStar Taq DNA Polymerase	500U|2500U
WE0136	SuperSYBR Mixture(不含ROX校正染料)	1ml|5ml
SY0024	常規Taq DNA聚合酶	1000U
SY0051	礦物油	100ml

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名稱：即用型高保真PCR試劑盒
貨號：BTN90708
規格：1.5mL
本產品是即用型的2×高保真PCR預配反應液，含有除引物、模板以外的所有PCR試劑，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等，特別適合于高保真PCR反應。

產品特點：
1. Pfu DNA聚合酶是使用zuì廣泛的高保真酶，其保真度為普通Taq酶的10倍。
2. 使用時只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進行PCR反應，非常方便，簡化了PCR的準備工作。
3. PCR反應所必需試劑全集于一管之中，數分鐘即可完成反應體系配置。由于加樣過程少，有利于減少污染，降低實驗誤差。
4. 本產品A型含電泳染料，PCR反應液可直接上樣電泳，進一步簡化了操作。
5. 由于各成分的濃度和比例都經過精心優化，反應的靈敏度高，特異性強。
6.適用于基因的高保真擴增和基因定點突變等實驗，得到的PCR產物可用于平末端克隆。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為12個月。

使用方法：
將本產品與用戶自備的模板，引物混合液按下列推薦使用量(30μL反應體系)加入PCR 管中即可進行PCR，反應結束后直接取5-15μL電泳檢查擴增結果。如果反應體系不是30μL，各成分需要按比例增加或減少。

試劑		加入量
2×高保真PCR MagicMix		25μL
DNA模板(自備)	哺乳動物基因組DNA	0.5-1μg
	酵母基因組DNA	5-500ng
	細菌基因組DNA	0.5-50ng
	質粒DNA	5-500ng
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自備)		10-20pmol each
補水到		30μL

參考擴增條件：

預變性	94℃	4min
PCR(30個循環)	94℃	30s
	50℃	30s
	68℃	0.5kb/min
延伸	68℃	10min

注意事項：
1. 本產品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反應速率低，因此我們推薦的擴增延伸反應時間為每kb 需2 分種。
2. Pfu酶3′-5′外切酶活性可降解引物，所以強烈建議在冰上配置完成PCR反應液后，立即放入PCR 儀中進行擴增，擴增完畢后立即進行電泳檢測。
3. 本產品擴增產物為平末端，不可以直接進行TA 克隆，可以使用ClionB載體(BTN51104)進行克隆。如需要進行TA克隆，建議對PCR產物純化后，用加A 試劑盒(BTN60105)加A后再進行TA克隆。
4. 由于Pfu 無 5′到 3′外切酶的活性，所以本試劑盒不能用于實時熒光PCR。

疑難解答：
Q：為何Pfu DNA Polymerase擴增效率不如Taq DNA Polymerase？
A：一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3′-5′的外切活性，所以在合成過程中，該酶會隨時校對新添加的核苷酸是否配對，影響了合成效率；二是它能通過3′-5′的外切活性使引物部分降解，降低引物結合模板的能力，進而影響擴增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q：使用本產品時還有哪些注意事項？
A：1.引物長度和濃度一般應比常規的PCR 長和高(考慮到被Pfu DNA Polymerase的3′-5′的外切活性降解的因素)；
 2.zuì好在反應前加Pfu DNA Polymerase。

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