北京百奧萊博供應的M-MLV反轉錄酶（RNase 用于科研目的，我公司的M-MLV反轉錄酶（RNase 品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括M-MLV反轉錄酶（RNase H-)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：M-MLV反轉錄酶（RNase H-)
英文名稱：M-MLV Reverse transcriptase （RNase H-)
產品貨號：WH0169
產品規格：10kU

M-MLV是一種沒有RNase H活性的RNA依賴的DNA聚合酶。可以催化以RNA或DNA-RNA雜交鏈為模板的互補DNA的聚合反應。本酶的RNase H結構域經過點突變分子改造，從而實現了該酶RNase H活性的缺失，這種分子改造不但使得本產品與M-MLV野生型相比具有更高的熱穩定性，而且還提高了本產品的反轉錄效率和對長片段cDNA的反轉錄能力。

產品特點：
·酶活效率高：的逆轉錄酶活性，后續實驗兼容性好。
·底物范圍廣：適用于所有RNA，尤其是具有復雜二級結構的RNA模板。
·反轉片段長：cDNA鏈合成可以達12.3 kb。

適用范圍：
1．在二代測序（NGS）應用中，用于RNASeq文庫構建過程中cDNA鏈的合成；
2．全長cDNA鏈合成
3．cDNA文庫的構建；
4．一步法RT-PCR；
5．RACE分析。

產品來源：
重組E.coli菌株,含有從莫洛尼氏鼠中克隆的改良后的莫洛尼氏鼠白血病病毒逆轉錄酶基因，基因已通過點突變使RNase H活性缺失。蛋白分子量大小約為：75.9kDa。

產品組成：

組分	規格
M-MLV（200U/μl）	2×25μl
5× M-MLV RT Buffer	2×150μl
100mM DTT	100μl

儲存條件：-25℃~-15℃保存，保質期一年。

單位定義：1單位活力定義為在37℃，10分鐘內，以polyr（A)/Oligo（dT)作為模板和引物，將1nM dTTP摻入到酸不溶物質所需的酶量。

質量控制：

性質	描述
蛋白純度	＞99%
酶活性	20,000~28,880 U/mg
單鏈核酸外切酶活性	2000 U酶中，＜2.0%
雙鏈核酸外切酶活性	2000 U酶中，＜1.0%
雙鏈核酸內切酶活性	2000 U酶中，未檢出
宿主基因組污染	2000 U酶中，＜10拷貝
非特異RNAse殘留	2000 U酶中，未檢出

注意事項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．用于cDNA合成反應的溶液試劑盡可能用DEPC進行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時，先用經過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進行濾除菌處理。
2．RNA樣品要避免基因組DNA污染。
3．避免反復凍融RNA，使RNA保持在冰浴中處融化狀態。
4．當使用酶類時，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部，由于酶粘度高，吸取時應慢慢吸取。
5．若后續PCR反應需要擴增的片段較長（>5 kb），則建議用RNase H對cDNA產物進行處理。處理方法為：向反轉錄產物中（20μl體系）加入1 μl RNase H（5 U/μl），37℃下孵育20min，之后65℃處理10 min進行酶滅活。

使用方法：
1.將模板RNA在冰上解凍；引物、5× M-MLV RT Buffer、dNTPs混合液、100mM DTT和RNase-free ddH2O在室溫（15~25℃）條件下解凍，解凍后迅速置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體。
2.按照下表的體系在冰浴的無核酸酶的離心管中配制混合液：

成分	用量
RNA模板	1ng~1μg Total RNA 或1ng~250 ng Poly（A) mRNA
50μM Oligo-dT（15-20)或者 50μM Random Primer或者 10 μM基因特異引物	1~2μl
dNTPs（10mM)	1μl
RNase-free H2O	補充至12μl

3.65℃孵育5 min，然后置于冰上2 min。
4.在上述反應液的基礎上繼續加入下表所列的反轉錄組分：

成分	用量
上述反應液	12μl
5×M-MLV RT Buffer	4μl
RNasin（40U/μl）	1μl
M-MLV（200U/μl）	1μl
100mM DTT	2μl

5.如果引物為Random Primer則需將體系現在25℃下孵育10 min；如果引物為Oligo-dT和基因特異性引物則需將體系現在25℃下孵育2 min。
6.42℃孵育60 min。
7.70℃加熱15 min終止反應，置于冰上進行后續實驗或冷凍保存。如果后續進行PCR反應，則cDNA產物用量不應超過PCR反應體系的1/10。

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