PstI-HF限制性內切酶是高品質的工具酶產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于科學研究，本品質量穩定，價位合理，需要PstI-HF限制性內切酶等工具酶產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括PstI-HF限制性內切酶在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：PstI-HF限制性內切酶
英文名稱：PstI-HF Restriction Endonuclease
產品貨號：SV0619
產品規格：50KU|50KU|10KU|10KU|5KU

在不同反應緩沖液的活性:
BalbBuffer 1.1: 10%
BalbBuffer 2.1: 75%
BalbBuffer 3.1: 50%
CutSmart Buffer:
特性:
CutSmart、重組酶、基因工程改造酶、省時酶、高保真酶。
反應條件:
CutSmart 緩沖液，37℃。
濃度:
20,000和100,000units/ml。
甲基化敏感性:
對 dam、dcm 和哺乳動物 CpG 甲基化均不敏感。

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貨號	名稱	規格
BTN130655	熱敏磷酸酶	500U
YT512	末端脫氧核糖核酸轉移酶(TdT酶)	500U
SV0004	AbaSI限制性內切酶	1KU
SV0030	AgeI-HF限制性內切酶	1,500U|300U
SV0032	AgeI-HF RE-Mix	25次
SV0055	ApoI限制性內切酶	5KU|1KU|500U
SV0082	BaeI限制性內切酶	1250U|250U

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名稱：MMLV逆轉錄酶
貨號：BTN60905
規格：10000U
該酶是突變型的MMLV逆轉錄DNA聚合酶，從表達莫洛尼氏鼠白血病病毒reverse transcriptase基因(pol基因)的E.coli細胞中分離純化而得，由一個分子量為76.1KDa的單亞基組成，可催化以單鏈DNA、RNA或DNA:RNA雜交鏈為模板的互補DNA鏈的聚合反應。跟野生型相比,它沒有RNase H活性。

產品特點;
1．延伸性能好，可合成長達12.5 Kb的fμLl-length cDNA。
2．zuì佳反應溫度為42℃，但在50℃時仍然有活性，70℃10分鐘能使其失活。
3．能以Cy3-，Cy5-，rhodamine-，aminoallyl-，fluorescein等標記的nucleotides 為底物。
4．可用于first strand cDNA 合成，second strand cDNA 合成，DNA labeling，RNA primer extension等。
5．與PCR 兼容，RT產物可以用于PCR和real-time PCR。
6．能被金屬螯合劑，無機磷酸，焦磷酸和多胺抑制。
7．沒有RNase H活性。

產品組成：

成分	規格
MMLV逆轉錄酶(200U/μL)	50μl
5×RT Buffer	1ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有限期一年。

使用方法：

一、合成PCR用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反應體系:

加入物	加入量
總RNA 或poly(A)mRNA 或專一的RNA	100-500 ng 10-500 ng 0.01pg-500ng
注：RNA樣品不能有基因組DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或隨機引物(0.2ug/μL) 或RNA模板專一性引物	1μL 1μL 15-20pmol
注：隨機引物于RNA模板的比例跟zuì后得到的cDNA的平均長度成反比
RNase-free水	補水到12μL

2．70℃保溫5分鐘后立即冰浴。
3．嚴格按下表順序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保溫5分鐘。對富含二級結構的高GC RNA模板，可以改成45℃保溫5分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是25℃(5分鐘)。
5．加入1μL(200U)MMLV逆轉錄酶，反應終體積為20μL。
6．42℃保溫60分鐘(但如果使用隨機引物，需要先25℃保溫10分鐘，然后再轉移到42℃保溫60分鐘)。
7．70℃保溫10分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作為PCR模板使用，不需要純化。

二、合成建文庫用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反應體系:

加入物	加入量
poly(A)mRNA 或專一的RNA	1ug 0.5-1ug
注：RNA樣品不能有基因組DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或隨機引物(0.2ug/μL) 或RNA模板專一性引物	1μL 1μL 100pmol
注：隨機引物于RNA模板的比例跟zuì后得到的cDNA的平均長度成反比
RNase-free水	補水到12μL

2．70℃保溫5分鐘后立即冰浴。
3．嚴格按下表順序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保溫5分鐘。對富含二級結構的高GC RNA模板，可以改成45℃保溫5分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是25℃(5分鐘)。
5．加入1μL(200 U)MMLV逆轉錄酶，反應終體積為20μL。
6．42℃保溫60分鐘(但如果使用隨機引物，需要先25℃保溫10分鐘，然后再轉移到42℃保溫60分鐘)。
7．70℃保溫10分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二鏈cDNA的合成或放置在-20℃。

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