T4多聚核苷酸激酶是高品質(zhì)的工具酶產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，我公司的T4多聚核苷酸激酶品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶(hù)訂購(gòu)。...

特別提示：包括T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)
英文名稱(chēng)：T4 Polynucleotide Kinase
產(chǎn)品貨號(hào)：WE0237
產(chǎn)品規(guī)格：500U|2500U

  T4多聚核苷酸激酶，是由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因的來(lái)源為T(mén)4嗜菌體，可以催化磷酸在ATP的γ-位和寡核苷酸鏈(雙鏈或單鏈DNA或RNA)的5’-羥基末端以及3’-單磷酸核苷間進(jìn)行轉(zhuǎn)移和交換，同時(shí)還具有3’磷酸酶活性，能將3’-磷酸基團(tuán)從寡核苷酸的3’磷酸末端、脫氧3’-單磷酸核苷和脫氧3’-二磷酸核苷上水解掉。該T4多聚核苷酸激酶可用于寡核苷酸、DNA或RNA的5’末端標(biāo)記或磷酸化；催化3’磷酸化的單核苷酸5’磷酸化以及去除3’端磷酸基團(tuán)等。本品于75℃加熱10分鐘可使其失活，加入EDTA也可使其失活，金屬離子螯合劑、磷酸鹽、銨根離子、大于50 mM的KCl和NaCl均可顯著抑制其活性。

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SV0147 BpmI限制性?xún)?nèi)切酶 500U|100U
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名稱(chēng)：Sulfolobus DNA聚合酶IV
貨號(hào)：BTN131182
規(guī)格：100U
Sulfolobus DNA聚合酶IV是一種熱穩(wěn)定的Y家族DNA聚合酶，能在復(fù)制過(guò)程中繞過(guò)DNA損傷，因而能以多種損傷DNA為模板合成DNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．以損傷DNA為模板合成DNA。
2．DNA修復(fù)。

產(chǎn)品組成：

成份	規(guī)格
Sulfolobus DNA聚合酶IV(2000U/mL)	50μL
10×Buffer	1.5mL
使用手冊(cè)	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

名稱(chēng)：Klenow片段(無(wú)外切酶活性)
貨號(hào)：YT510
規(guī)格：100U
本酶是沒(méi)有外切酶活性的Klenow片段，是大腸桿菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突變體。Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5"→3"和3"→5"外切酶活性。

特點(diǎn)：由于Klenow Fragment，Exo-沒(méi)有外切酶活性，其在末端補(bǔ)平時(shí)經(jīng)常會(huì)在3"末端額外加上1個(gè)或多個(gè)核苷酸，因此不能用于產(chǎn)生平末端而用于后續(xù)的連接。
用途：5"突出末端的標(biāo)記；隨機(jī)引物法進(jìn)行DNA標(biāo)記；Sanger雙脫氧法進(jìn)行DNA測(cè)序等。
來(lái)源：由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因的來(lái)源為突變的 polA 基因片段。
分子量：約68kDa(單體)。
活性定義：37℃30分鐘內(nèi)，催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。
酶活性檢測(cè)條件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
純度：不含DNA內(nèi)切酶，不含RNase。
酶儲(chǔ)存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2， 10mM DTT。
失活或抑制：75℃加熱10分鐘或加入適量EDTA均可導(dǎo)致Klenow Fragment，Exo-失活。金屬離子螯合劑，無(wú)機(jī)焦磷酸鹽(PPi)，大劑量的無(wú)機(jī)磷酸鹽(Pi)均對(duì)Klenow Fragment，Exo-有抑制作用。
儲(chǔ)存條件：-20℃。

使用說(shuō)明：

1. 隨機(jī)引物法進(jìn)行DNA標(biāo)記：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：
DNA———————————————————————————————10μl(100ng)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————5μl
125μM random decamer or hexamer primer——————————————10μl
補(bǔ)充無(wú)核酸酶的去離子水——————————————————————至40μl
混勻后沸水浴孵育5-10分鐘，立即置于冰浴冷卻。進(jìn)行后續(xù)步驟前離心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled—————————4μl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)————————————1.85MBq (50μCi)
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————1μl (5U)
補(bǔ)充無(wú)核酸酶的去離子水———————————————————————至50μl
b. 按上表設(shè)置好反應(yīng)體系后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用 Vortex在zuì低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 對(duì)于random decamer primer，37℃孵育5分鐘；對(duì)于random hexamer primer，37℃孵育10分鐘。
d. 加入4μl 0.25mM dNTP，混勻后37℃孵育5分鐘。
e. 加入1μl 0.5M EDTA，pH8.0終止反應(yīng)。
f. 取1μl上述液體用于檢測(cè)標(biāo)記的效率。
g. 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它適當(dāng)試劑盒純化標(biāo)記好的探針。

2. 雙鏈DNA 5’突出(5’ overhang)末端的標(biāo)記：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：
Digested DNA ——————————————————————————10~15μl(0.1~4μg)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————2μl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) —————————0.74 MBq(20μCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)———————————2.96 MBq(80μCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled）————————2μl
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————0.2μl (1U)
補(bǔ)充無(wú)核酸酶的去離子水———————————————————————至20μl
b. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用 Vortex在zuì低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 30℃孵育15分鐘。
d. 75℃孵育10分鐘終止反應(yīng)。

3. 其他用途可以參考上述用途或適當(dāng)?shù)奈墨I(xiàn)資料進(jìn)行。

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