一步法熒光定量RT-PCR試劑盒是高品質的核酸擴增(PCR)產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，我公司專注于核酸擴增(PCR)產品的研發、生產和供應，為您提供的一步法熒光定量RT-PCR試劑盒質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括一步法熒光定量RT-PCR試劑盒（染料法)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：一步法熒光定量RT-PCR試劑盒（染料法)
英文名稱：Quant one step qRT-PCR Kit（SYBR Green)
產品貨號：WH0101
產品規格：50μl×50次

本試劑盒是采用SYBR Green嵌合熒光法進行Real Time One Step RT-PCR的專用產品。使用本制品進行Real Time RT-PCR反應可在同一反應管內連續進行，操作簡單，并能有效防止污染。本反應體系由于可以對擴增產物進行實時檢測，大大提高了檢測靈敏度，并省略了PCR反應后的電泳步驟，非常適合于微量RNA的檢測。本試劑盒適用于一步法Real Time RT-PCR，可以準確簡便地進行mRNA表達分析，適用于各種類型熒光定量PCR儀。

本試劑盒中使用了zuì適合于Real Time RT-PCR的反轉錄酶Quant RTase和Hotmaster Taq DNA polymerase。Quant Reverse Transcriptase是一種由工程菌進行重組表達的全新逆轉錄酶，具有與RNA高親和性的特點，能通讀GC含量高、二級結構復雜的RNA模板。Quant RTase是在Quant Reverse Transcriptase基礎上進行修飾，使之更適合一步法Real Time PCR。Hotmaster Taq DNA Polymerase利用抑制劑通過溫度調節方式封閉Hotmaster Taq DNA Polymerase的底物結合位點，溫度低于40℃時，形成非活性的酶-抑制劑復合物，當溫度升高至引物特異性的退火溫度時，結合平衡向模板-特異性引物復合物形成方向移動，因此zuì大限度的減少PCR擴增全程中的非特異性擴增產物產生，大大提高了熒光定量PCR反應的性。

產品特點：
1．一步完成Real Time RT-qPCR反應，快速、準確地對RNA病毒等微量RNA進行分析。
2．PCR使用了改良后的HotMaster Taq Polymerase，可以進行Hot Start法PCR反應，再與專門開發的Buffer系統相結合，具有高擴增效率，高擴增靈敏度，高擴增特異性之特點。
3．2×Quant One Step RT-qPCR Mix （SYBR)中預先混有SYBR Green I和ROX Reference Dye等，無需花時間融解，反應液配制十分簡單方便。
4．可在寬廣的定量區域內得到良好的標準曲線，對靶基因進行準確定量檢測，重復性好，可信度高。

試劑盒組成：

組分	50μl×50次
2×Quant One Step RT-qPCR Mix （SYBR)*	1.3ml
HotMaster Taq Polymerase （2.5U/μl)	130μl
Quant RTase （for one step)	30 μl
RNase-Free ddH2O	2×1 ml

*內含dNTP Mixture，Mg2+，SYBR Green I和ROX Reference Dye等。
儲存條件：-20℃避光保存

適用的Real Time PCR擴增儀：
ABI PRISM 7000/7700/7900HT，7300/7500 Real-Time PCR System，7500 Fast
Real-Time PCR System （Applied Biosystems)
OPTICONTM/CFX96 （BIORAD)
Light Cycler480 （Roche)
Smart Cycler?
System （Cepheid)
Mx3000 P/Mx3005P （Stratagene)
Line-Gene （Bioer，杭州博日)

注意事項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．當同時需要進行數次Real Time One Step RT-qPCR反應時，應先配制各種試劑的混合液（Master Mix；其中包括RNase-Free ddH2O、Buffer、各種酶等），然后再分裝到每個反應管中。這樣可使所取的試劑體積更準確，減少試劑損失，避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或實驗樣品之間產生的誤差。
2．使用HotMaster Taq Polymerase和Quant RTase時，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部；由于酶保存液中含有高濃度的甘油，粘度高，分取時應慢慢吸取。
3．保存2×Quant One Step RT-qPCR Mix （SYBR)或配制Real Time One Step RT-qPCR反應液時應避免強光照射。
4．反應液的配制、分裝時請一定使用新的（無污染的）槍頭或帶濾心槍頭、Microtube等，盡量避免污染。
5．制品只能使用特異性反轉錄引物，不能使用Random Primer和Oligo dT Primer等進行反轉錄反應。

操作步驟：
1．按下列組份配制50μl體系的RT-qPCR反應液（反應液配制請在冰上進行）。

成分	使用量	終濃度
2×Quant One Step RT-qPCR Mix （SYBR)	25 μl	1×
Hotmaster Taq Polymerase（2.5U/μl)	2.5 μl
Quant RTase （for one step)	0.4 μl
正向引物	-	0.2μM
反向引物	-	0.2μM
RNA模板	-
RNase-Free ddH2O	至50μl

  注意：
  ①通常引物終濃度為0.20μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可以在0.1-1.0 μM范圍內調整引物濃度。
  ②建議在反應液中使用10pg-100ng的Total RNA為模板。
2．進行Real Time One Step RT-qPCR反應。
  PCR反應管請用離心機瞬時離心后放入熒光定量PCR儀中進行Real Time PCR反應。建議采用下列圖表顯示的標準PCR反應程序，如果使用該程序得不到良好的實驗結果時，再進行PCR條件的優化。

循環	步驟	溫度	時間	內容
1×	1	50℃	30min	反轉錄
1×	2	95℃	2min	起始模板變性
35-45×	3	94℃	20sec	PCR循環中模板變性
	4	50-60℃	20sec	退火
	5	68℃	20sec	延伸

3．實驗結果分析。
  反應結束后確認Real Time One Step RT-qPCR的擴增曲線和熔解曲線，進行RT-PCR定量時制作標準曲線等。

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名稱：PCR Mix染料
貨號：BTN131212
規格：10mL
本產品可加入到PCR反應液中，使PCR產物可直接上樣電泳，其分子量相當于50bp大小的DNA片段，不干擾觀察。
注：本產品不是PCR熒光染料，是一類可見光染料(類似電泳用的溴酚藍，二甲苯藍等指示劑)

儲存條件：低溫運輸和-20℃保存、有效期一年。

名稱：Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)
貨號：BTN100814
規格：5μg
Oligo(dT)12-18為長度在12到18之間的Oligo(dT)混合物，可以用于以帶polyA尾巴的RNA為模板的鏈cDNA合成。建議每20μL反應體系使用0.5μg oligo(dT)。

儲存條件：低溫運輸和-20℃保存，有效期一年。

名稱：PCR試劑盒(含YT Taq酶，Buffer，dNTP，上樣液)
貨號：YT381
規格：400次
本PCR試劑盒帶有YT Taq DNA Polymerase（YT373）、PCR buffer、dNTP和上樣緩沖液，自備模板和引物即可進行PCR反應，適合用于各種常規PCR以及T載體克隆、點突變等，能在擴增DNA模板的情況下同時保證高保真性。本試劑盒用于50微升的PCR反應體系，足夠用于160個反應，用于20微升的PCR反應體系，足夠用于400個反應。

產品組份：
YT Taq DNA Polymerase (5U/μl)————200U
10×Taq Buffer (with Mg2+)——————1ml
dNTP (2.5mM each)——————————0.7ml
6×DNA Loading Buffer————————1ml×2

儲存條件：-20℃

名稱：dTTP溶液(100mM)
貨號：YT388
規格：250μl
dTTP即2’-deoxythymidine 5’-triphosphate，中文名為脫氧胸苷三磷酸，常用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反應、DNA測序、DNA標記等各種常規分子生物學反應。

分子式：C10H14N2O14P3Na3
分子量：548.1(酸形式的分子量為482.1)
zuì大吸收波長：267nm。

本dTTP溶液用超純水配制，并用高純度NaOH溶液調節pH值至7.0，濃度為100mM，即100mmol/L。
本dTTP溶液不含DNase、RNase、phosphatase和蛋白酶。
本dTTP溶液經測試，可以直接用于PCR等各種常規分子生物學反應。

儲存條件：-20℃。

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