高特異性熱啟動Taq DNA聚合由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品僅用于生物化學研究方面，我公司專注于核酸擴增(PCR)產品的研發、生產和供應，為您提供的高特異性熱啟動Taq DNA聚合質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括高特異性熱啟動Taq DNA聚合酶在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：高特異性熱啟動Taq DNA聚合酶
英文名稱：Top HotStart Taq DNA Polymerase
產品貨號：MT0026
產品規格：250U|2500U

本品為化學修飾的熱啟動Taq DNA 聚合酶，獨特的封閉技術使得該酶在50℃以下無活性，僅通過95℃加熱15分鐘后才能完全恢復活性，從而啟動PCR擴增，提高PCR擴增的特異性，降低引物二聚體、非特異性條帶的擴增、提高特異性PCR產物的產量。該熱啟動Taq酶具有5"-3"外切酶活性，可用作TaqMan探針的定量PCR。同時該酶擴增的PCR產物具有“A”尾巴，可直接用于TA克隆。以λDNA為模板，可以很好的擴增10 Kb的DNA片段；以人類基因組DNA為模板,可以很好的擴增4 Kb的DNA片段。本品常用于PCR擴增、TaqMan探針的定量PCR、DNA測序等。

產品特點：
1．化學法修飾熱啟動酶，熱啟動；
2．高特異性，有效抑制非特異性擴增；
3．無外源性核酸污染，純度高達99.9%。

產品組成：

組分	250U	2500U
Top HotStart Taq DNA Polymerase(5 U/μl)	50μl	500μl
*10×Top HotStart PCR Buffer	1ml	5ml

*10×Top HotStart PCR Buffer含25mM Mg2+，通常不再需要額外添加Mg2+即可獲得良好的擴增結果。

保存條件：-20℃保存，有效期2年。

單位定義：一個活力單位即在在74℃條件下，30分鐘內催化10nmol dNTP的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量。

反應實例：

圖：應用不同公司的熱啟動Taq DNA 聚合酶擴增雞PPAR基因片段（522bp，72％GC含量）。
M: DNA Marker 2000；
泳道1-2: Top HotStart Taq；
泳道3-4: T公司抗體封閉法 HotStart Taq；
泳道5-6:普通Taq酶。

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貨號	名稱	規格
YT381	PCR試劑盒(含YT Taq酶，Buffer，dNTP，上樣液)	400次
YT382	PCR Master Mix (含藍色電泳染料)	400次|2000次|10000次
WE0110	2×Babuddy MasterMix(含染料)	1ml|5ml
WE0125	高保真多重PCR Mix(下一代測序用)	1ml|5ml
WE0145	實時熒光定量PCR的預混體系(探針法)(低含量ROX校正染料)	5ml
ALH223	Pfu DNA聚合酶	500U|3000U

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名稱：可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑
貨號：BTN60901
規格：0.3mL
Taq DNA聚合酶是進行PCR的zuì常用工具酶，但是由于它在常溫下還是具有部分活性，所以經常會出現非特異的擴增產物，尤其是當PCR反應體系中有大量非特異DNA存在的時候。目前zuì常見的解決方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗體和使用經過化學修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但前者的缺點是加熱后抗體會不可逆失活，后者的缺點是需要預熱處理使酶激活。

產品特點：
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性，即常溫抑制Taq酶活性，在45℃以上抑制功能喪失，當溫度降低到45℃以下后，抑制活性又得以恢復。
2. 耐熱，產品本身為非蛋白質試劑，遠比Anti-Taq抗體穩定，便于保存和運輸。
3. 使用簡單，在加Taq酶前將本產品按PCR反應體積的1/10直接加入即可。
4.適用范圍廣，除Taq DNA聚合酶外，還可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一種酶的抗體一般對另一種酶的活性沒有抑制作用。
5.與后續的RT-PCR兼容。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前，按PCR反應終體積1/10的比例將本產品加入到反應體系中混勻，然后再加入DNA聚合酶，啟動PCR反應。

名稱：即用型PCR試劑盒(含染料)
貨號：BTN90805
規格：1ml×10|5mL×20
本產品內含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR增強劑、上樣染料等所有PCR所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR反應，具有廣泛的用途。

產品特點：
1.擴增效率和靈敏度更高。
2. 方便，用戶只需準備模板和引物既可以進行PCR實驗。
3.快捷，操作步驟已經zuì大限度地簡化，能減少污染，降低實驗誤差。
4.產物可直接用于T載體克隆，不需要額外的加A反應。
5.染料單獨提供，方便客戶組合。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以30μL的標準PCR反應體系為例)
在一干凈的PCR管中，加入下列成分：

試劑		加入量
PCR MagicMix		15μl
DNA模板(自備)	哺乳動物基因組DNA	0.5-1μg
	酵母基因組DNA	5-500ng
	細菌基因組DNA	0.5-50ng
	質粒DNA	5-500pg
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自備)		10pmol each
補水到		30μL

放入PCR儀中進行PCR,結束后取5-10μL直接上樣電泳，按照1.0mL PCR MagicMix加入40μL專用染料的比例將40μL專用染料加入到1mL PCR MagicMix中
注意：
1．如果反應體系不是30μL，各成分需要等按比例增加或減少。
2．如果DNA模板中有PCR不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA樣品常含此類抑制物)，可以在PCR體系中加入1/10的PCR抑制物清除劑(BTN60804，30μL體系中加3uL)，可能會對PCR有幫助。

PCR反應的影響因素
變性溫度與時間：模板變性溫度是決定PCR反應中雙鏈DNA解鏈的溫度，達不到變性溫度就不會產生單鏈DNA模板，PCR也就不會啟動。變性溫度低則變性不完全，DNA雙鏈會很快復性，因而減少產量。變性溫度太高，又會影響酶的活性。一般情況下可設為94℃ 20~30秒，高溫時間應盡量縮短，以保持耐熱DNA聚合酶的活力，zuì高變性溫度不宜超過95℃。
退火溫度與時間：退火溫度決定PCR特異性與產量。溫度高特異性強，但過高則引物不能與模板牢固結合，DNA擴增效率下降；溫度低產量高，但過低可造成引物與模板錯配，非特異性產物增加。合適的退火溫度一般在45~68℃之間。設置特定反應的zuì適退火溫度，可根據引物的(G+C)%含量進行推測，一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，退火時間一般為30~60秒，足以使引物與模板之間完全結合，長時間退火沒有必要。
延伸溫度與時間：PCR反應的延伸溫度一般選擇在70~75℃之間，延伸時間根據所用聚合酶擴增速度和擴增片段大小設定，如同樣擴增2 Kb片段，若使用Taq酶只需1分鐘，使用Pfu酶則應設定2分鐘以上。延伸時間過長會導致非特異性擴增帶的出現，時間太短則可能得不到擴增產物或得到一些短的非特異性片段。
循環次數：可根據模板DNA的量、擴增片段的大小和擴增產物的下步應用等因素，設定20-40個循環。循環次數太少，擴增量不足，如果循環次數太多，錯配幾率會增加，非特異性背景嚴重。所以，在保證產物得率的前提下，應盡量減少循環次數。
酶量：50μl反應體系可用0.5-5 U酶，酶量的選擇與模板DNA的量，擴增片段大小等有關，酶量過多易發生非特異性反應，而且可能增加突變的機率，尤其在進行高保真擴增時，應盡量減少酶量，但酶量過少時反應性能下降。
模板：模板可以是單鏈DNA，也可以是雙鏈DNA，質粒DNA的擴增效率略低于線狀DNA。模板加量一般不需太多，不超過1μg為宜，因為加量過多可能導致非特異性擴增增加，但是要考慮模板中靶序列的含量。例如，使用基因組為模板擴增單拷貝或低拷貝靶序列，就需要適當加大模板用量。
引物：引物與模板配對的長度應至少為17個核苷酸，zuì高不宜超過30個核苷酸，zuì佳長度為20~24個核苷酸，如需插入酶切位點，應在酶切位點5′端多加幾個堿基，有利于酶切。引物的(G+C)%含量組成應均勻，盡量避免含有相同的堿基多聚體。兩個引物中(G+C)%含量應盡量相似。引物內部應避免形成明顯的次級結構，如發夾結構。兩個引物之間不應發生互補，特別是在引物3′端。如果可能，引物3′端zuì好富有GC，這樣退火后有利于引物3′端的延伸。人工合成的引物zuì好經過色譜層析純化或PAGE純化，以除去未能合成至全長的短鏈等雜質。引物的終濃度一般為0.1-2μm左右，濃度太高會導致非特異性擴增，太低則擴增產物太少。

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