Stable化學感受態細胞由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，Stable化學感受態細胞是我司眾多優質克隆與表達之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括Stable化學感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：Stable化學感受態細胞
英文名稱：Stable Chemically Competent Cell
產品貨號：MQ0021
產品規格：10×100μl/50×100μl

Stable菌株是高轉化效率菌株，是逆轉錄病毒/慢病毒載體系統推薦使用的菌株，具有與Stbl2，Stbl3完全不同的基因型，但是表現出比Stbl2，Stbl3更優異的性能，特別適合慢病毒或具有末端重復序列DNA片段的克隆。基因組含有重組酶recA1 rel A1突變，可有效抑制長片段末端重復區的重組，降低錯誤重組的概率；同時含有核酸酶endA1突變，避免了提取質粒過程中核酸酶的污染，大大提高了高純度病毒質粒的產量和質量。lacZΔM15的存在使Stable可用于藍、白斑篩選，此菌株具有四環素和鏈霉素抗性，Stable感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。
保存條件：-80℃
基因型：
F"proA+B+ lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10(TetR)?(ara-leu)7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15 e14-Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL(StrR)rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS-mcrBC)
操作說明：
1.Stable感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，6分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置5分鐘，晃動會降低轉化效率。
3.向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營養豐富，可提高轉化效率)。
4.37℃，225 rpm復蘇60分鐘或30℃，225 rpm復蘇90分鐘。(當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃，225 rpm復蘇60分鐘)
5.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C.或LB培養基上。
6.將平板倒置放于37℃或30℃培養箱過夜培養。(當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃培養過夜)。
優點及應用：
1.Stable菌株與Stbl3相比，基因組含有endA突變，提高了病毒質粒的產量和純度。
2.Stable菌株比Stbl3生長速度快，倍增時間是Stbl3的1.5倍。
3.Stable菌株基因組中含有fhuA突變，賦予其對噬菌體T1的抗性。
4.Stable菌株具有較高的轉化效率，pUC19檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。
5.Stable菌株基因組中含有lacZΔM15，可用于藍白斑篩選實驗。
6.Stable菌株特別適合于不穩定DNA片段的克隆，及逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建和擴繁。
注意事項：
1.對不穩定DNA片段的克隆或逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建，涂板后平板應在30℃培養，以減少發生錯誤重組的概率。
2.制備高純度病毒質粒時，應使用新鮮轉化的平板接菌，新鮮菌液提取質粒，菌液不可低溫保存后使用。
3.對不穩定的克隆或病毒質粒優先以質粒狀態保存，盡量避免將質粒保存在大腸桿菌細胞中。
4.感受態細胞zuì好在冰中緩慢融化。插入冰中10分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。混入目的DNA時應輕柔操作。
5.轉化高濃度的質粒或率的連接產物可相應減少zuì終用于涂板的菌量。

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名稱：大腸桿菌DH5α化學感受態細胞
貨號：BTN81024
規格：0.1mL*10
 本產品是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。DH5α是一種常用于質粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因產物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。使用pUC19質粒檢測，轉化效率不低于107，適用于的質粒DNA克隆并能保證高拷貝質粒的穩定復制。
 本菌種來源于Hoffman-Berling 1100菌種。

基因型	表現型
deo R	組成型合成脫氧核糖
end A1	核酸內切酶I缺失
gyr A96	具有萘啶酮酸抗性
hsd R17	限制性酶EcoK缺失
△(lac)U169	lac基因缺失
rec A1	DNA重組活性降低
Rel A1	允許在無蛋白質合成時有RNA合成
sup E44	抑制琥珀突變突變，為某些噬菌體必需
thi-1	不能自身合成硫氨
φ80(lac ZΔM15)	提供α-互補所需的ω片斷

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入800μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，200rpm(小于225rpm)振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。
注意事項：
1、涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm ，2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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