DNA退火緩沖液(5×)是高品質的核酸擴增(PCR)產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于生化實驗研究等領域，我公司的DNA退火緩沖液(5×)品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括DNA退火緩沖液(5×)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：DNA退火緩沖液(5×)
產品貨號：GL1300
產品規格：1ml

用途：
用于DNA oligo退火的緩沖液

注意事項：
無菌溶液。主要由氯化鉀、Tris、氯化鎂等組成，經高壓滅菌處理。

儲存條件：-20℃，12個月

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貨號	名稱	規格
BTN130815	taq酶抗體	500U
BTN70902	5M甜菜堿溶液，PCR級	1.5mL
YT400	核酸酶清除劑(核酸酶噴霧清除劑)	250ml
WE0150	一步法逆轉錄實時熒光定量PCR試劑盒(高含量ROX校正染料)	100次
RFT160	5M甜菜堿溶液(PCR級)	5×1ml
JN0029	BloTaq血液DNA聚合酶	400U

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名稱：可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑
貨號：BTN60901
規格：0.3mL
Taq DNA聚合酶是進行PCR的zuì常用工具酶，但是由于它在常溫下還是具有部分活性，所以經常會出現非特異的擴增產物，尤其是當PCR反應體系中有大量非特異DNA存在的時候。目前zuì常見的解決方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗體和使用經過化學修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但前者的缺點是加熱后抗體會不可逆失活，后者的缺點是需要預熱處理使酶激活。

產品特點：
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性，即常溫抑制Taq酶活性，在45℃以上抑制功能喪失，當溫度降低到45℃以下后，抑制活性又得以恢復。
2. 耐熱，產品本身為非蛋白質試劑，遠比Anti-Taq抗體穩定，便于保存和運輸。
3. 使用簡單，在加Taq酶前將本產品按PCR反應體積的1/10直接加入即可。
4.適用范圍廣，除Taq DNA聚合酶外，還可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一種酶的抗體一般對另一種酶的活性沒有抑制作用。
5.與后續的RT-PCR兼容。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前，按PCR反應終體積1/10的比例將本產品加入到反應體系中混勻，然后再加入DNA聚合酶，啟動PCR反應。

名稱：即用型易錯PCR試劑盒
貨號：BTN101005
規格：100次
本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯PCR而開發。易錯PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對功能的特性，在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法，則可從構建的突變庫選出所需突變體。

產品特點：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的優越性。
2. 配方經過精心優化，突變率穩定，突變沒有趨向性。易錯PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單，但如果在PCR引物中設計位點，則可使產物克隆到表達載體，也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4.可用于連續易錯PCR，只需把上一次易錯PCR的產物用作下一次易錯PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增1kb以下的產物，對于1kb以上的產物，建議分段擴增。

試劑盒組成：

成分	規格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易錯PCR Mix，10×	300μl
易錯PCR專用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為一年。

使用方法：
1.以30μL的標準PCR反應體系為例，如果反應體系不是30μL，各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的PCR管中，加入下列成分：

易錯PCR Mix,10×	3μl
易錯PCR 專用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自備DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自備，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
補水到	30μl

2. 按已經優化的PCR條件進行一定循環數的PCR(循環數與突變率的關系見下表)，然后取5μL電泳檢查。如果沒有優化的PCR條件，一般可以先嘗試下面的PCR條件：

PCR前變性	94℃ 3分鐘
易錯PCR	94℃ 1分鐘	循環30次(見注)
	45℃ 1分鐘
	72℃ 1分鐘

注：易錯PCR一般不需要熱啟動，也不需要在PCR結束后做延伸處理。

循環次數與突變幾率的關系
易錯PCR循環次數決定每個核苷酸位置的突變幾率，進而決定每個PCR產物可能得突變位點數，所以所需循環數由客戶根據需要改動。

PCR循環數	每個堿基突變幾率	PCR終產物中的突變位點數
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.電泳檢測是否得到預計長度的PCR產物。

疑難解答：
Q：易錯PCR與定點突變PCR有什么區別？
A：定點突變是指通過聚合酶鏈式反應(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組，也可以是質粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化)，包括堿基的添加、刪除、點突變等。它需要預先知道靶基因的序列。易錯PCR是一種隨機突變，它不需要預先知道靶基因的序列(引物結合部分除外)，但需要后續的篩選方法篩選自己所需要的突變。
Q：易錯PCR的錯誤率是多少？
A：易錯PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，對500bp的PCR產物，相當于有4%的PCR片段為野生型，12%的含一個突變，20%的含兩個突變，22%的含三個突變，18%的含四個突變，12%的含五個突變，12%的含六個或更多突變。
Q：如果需要每個核苷酸有高于0.66%的突變率，如何辦？
A：可以使用連續多次易錯PCR來提高突變率。但zuì好先用膠純化回收PCR片段,再用于下一輪PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR產物作為第二輪易錯PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯PCRzuì好使用所有第二輪的PCR產物作為模板，但需要在10mL體系中完成(可以分成很多100μL體系進行)。

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