農桿菌GV3101化學感受態細胞由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科學研究，我公司專注于克隆與表達產品的研發、生產和供應，為您提供的農桿菌GV3101化學感受態細胞質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括農桿菌GV3101化學感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：農桿菌GV3101化學感受態細胞
英文名稱：E.coli GV3101 Chemical Competent Cell
產品貨號：BTN140384
產品規格：10×100μL

 本產品為GV3101農桿菌化學感受態細胞，其具有利福平和慶大霉素抗性，適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作，經pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率高達104cfu/μg。

基因型：C58(rifR)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline。

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期一年。

自備試劑：質粒DNA、液氮等

使用方法：

轉化前準備
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 將抗性平板在 28℃培養箱中平衡至少15分鐘。
轉化方法
1. 取-80℃保存的農桿菌感受態細胞于冰水浴中融化。
2. 無菌條件下，向剛剛融化的感受態細胞懸液中加入需要轉化的質粒，每100μL感受態細胞加1μg質粒DNA，輕柔混勻。冰水浴中靜置10分鐘。
3. 將離心管置于液氮中速凍 5分鐘(注：也可以用干冰和無水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速將離心管置于37℃水浴靜置中5分鐘，不要晃動水面。然后快速轉至冰水浴中靜置5分鐘。
5. 加入800μl 無抗生素的2×YT或LB液體培養基，28-30℃振蕩培養2~3小時。使菌體復蘇，表達抗性。
6. 5000rpm離心1分鐘收菌，保留100μl左右上清，輕輕吹打重懸菌體，均勻涂布到含有相應抗生素的LB 固體培養基平板上，待平板中的液體完全吸收后，倒置平板，28-30℃培養48-72小時。
 注：當平板只含有50μg/mL kan時，28℃培養48小時即可；平板中同時加入50μg/mL kan，20μg/mL rif時，需 28℃培養 60h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 則需要 28℃培養 72-90小時。

注意事項：
1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10 ；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
2. 混入質粒時應輕柔操作。
3.轉化高濃度的質粒可相應減少zuì終用于涂板的菌量。
4. 利福平濃度不應高于25μg/μL，過高的利福平濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有 50μg/mL kan，若所用平板含有 20μg/mL rif 則轉化效率降低到1/2。
5.培養基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止 Ti質粒丟失，但鏈霉素不利于農桿菌的轉基因操作，所以一般培養農桿菌時不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質粒丟失的概率低(可以忽略)。
6.相關抗生素配方：

抗生素	配方	原液	工作液
羧芐青霉素(carb)	雙蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
硫酸卡那霉素(kan)	雙蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
鏈霉素(strep)	雙蒸水溶解	10mg/mL	50μg/mL
利福平(rif)	DMSO溶解	10mg/mL	20μg/mL
慶大霉素(gent)	雙蒸水溶解	20mg/mL	40μg/mL

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名稱：即用型藍白T載體D型(無RNA啟動子，有MCS)
貨號：BTN120514
規格：20次
本產品是用Xcm I酶切線性化的DNA片段，其兩個末端的5′都有一個突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶(如Taq DNA聚合酶)擴增得到的PCR片段。

產品特點：
1. 由于是通過酶切制備，所以載體兩端的帶T率為，遠高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉移酶在平末端載體加尾得到的T載體。
2. 克隆的陽性率一般在90%以上，縮短了篩選過程。
3. 插入位點兩側有多克隆(CMS)位點，便于對克隆的PCR片段進行近一步的分析。
4. 來源于pUC19質粒，兩側無RNA聚合酶啟動子。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。
6. T克隆位點位于β-半乳糖苷酶的α 肽編碼區內，可以進行藍白斑篩選。
7.含有絲狀噬菌體f1 復制起始子，可以制備單鏈DNA。

產品組成：

組分	規格
即用型藍白T載體D型(10ng/μL)	60μl
陽性對照(35ng/μl)	30μl

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期兩年。

質粒圖譜

多克隆位點


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