北京百奧萊博供應(yīng)的2×PCR預(yù)混反應(yīng)液用于科研目的，2×PCR預(yù)混反應(yīng)液是我司眾多優(yōu)質(zhì)核酸擴(kuò)增(PCR)之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括2×PCR預(yù)混反應(yīng)液在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：2×PCR預(yù)混反應(yīng)液
英文名稱：2×PCR Reagent
產(chǎn)品貨號：WH0080
產(chǎn)品規(guī)格：1ml（含染料)

本制品是一種擴(kuò)增靈敏性與兼容性很強、于DNA提取擴(kuò)增套裝試劑盒的PCR試劑，無需徹底去除蛋白等雜質(zhì)，便能進(jìn)行特異擴(kuò)增，該試劑包含Taq Plus DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)的增強劑和優(yōu)化劑及穩(wěn)定劑。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點，特別適合于高通量的篩選。

本制品使用方便快捷，能避免PCR操作過程中的污染，使用時只需取適量2×PCR Reagent溶液，加入快速DNA提取擴(kuò)增套裝所提取的模板和相應(yīng)引物，并加入去離子水補足體積，使2×PCR Reagent溶液的濃度為1×即可進(jìn)行反應(yīng)。產(chǎn)品為加染料（為藍(lán)色)產(chǎn)品，PCR反應(yīng)完成后，產(chǎn)物可直接電泳。

適用范圍：
·基因檢測：－擴(kuò)增靈敏性與兼容性、于快速DNA提取擴(kuò)增套裝試劑盒的PCR試劑，特別適合大規(guī)模基因檢測、轉(zhuǎn)基因檢測、病原微生物或病毒檢測應(yīng)用或研究。
·保真度較高的DNA擴(kuò)增和一些有特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板如GC含量高（>60%），有二級結(jié)構(gòu)等的擴(kuò)增：DNA片段的PCR擴(kuò)增、DNA標(biāo)記、引物延伸、序列測定等。PCR產(chǎn)物如需克隆，純化后可直接進(jìn)行T/A載體克隆，如需提高克隆效率，建議加A后再進(jìn)行T/A載體克隆。

產(chǎn)品組成：

組分	規(guī)格
2×PCR Reagent	1ml
ddH2O	1ml

2×PCR Reagent：
0.1U Taq Plus Polymerase/μl；500μM dNTP each；20mM Tris-HCl （pH8.3)；100 mM KCl；3 mM MgCl2；其它穩(wěn)定劑和增強劑

儲存條件：-20℃可長期保存，多次凍融不會影響活性。如需經(jīng)常使用，可存放于4℃

質(zhì)量控制：
經(jīng)檢測無外源核酸酶活性；能有效地擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因；室溫（15-25℃)存放一周，無明顯活性改變。

使用舉例：
注意：以下舉例僅供參考，實際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異，需根據(jù)實際情況，設(shè)定zuì佳反應(yīng)條件。

1..用2×PCR Reagent產(chǎn)品，以人基因組DNA為模板（快速DNA提取擴(kuò)增套裝提取模板)，擴(kuò)增1 kb的片段，反應(yīng)體系為20μl（如反應(yīng)體系不同，可按此比例增加或減少用量）。

加入物	加入量
Template	1～2μg
Primer 1（10 μM)	1μl
Primer 2（10 μM)	1μl
2×PCR Reagent	10μl
ddH2O	補至20μl

2．PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置：
  
3．結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取5 μl反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。

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名稱：DNA Shuffling試劑盒
貨號：BTN131178
規(guī)格：10次
DNA Shuffling即DNA分子的體外同源重組，它是一種分子水平上的定向進(jìn)化(directed evolution)技術(shù)，它以一個或多個基因為起始材料，通過先隨機斷裂成小片段，再進(jìn)行互為模板和引物的PCR(無外加引物)，zuì后再進(jìn)行常規(guī)PCR(外加引物)等處理，zuì后得到含有大量DNA重組突變的PCR產(chǎn)物。其原理示意圖如下：


產(chǎn)品特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板，無需單獨準(zhǔn)備各成分。
2.操作手冊經(jīng)過優(yōu)化，1-2天即可完成，節(jié)省大量優(yōu)化時間。
3.本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
PCR Mix 3.0，2×	1.5mL
DNase I溶液(1U/μL)	10μl
溶液A，10×	60μl
溶液B，10×	60μl
超純水	1mL
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。

使用方法：
1.待突變基因片段的制備：待突變基因片段可以用含此基因的質(zhì)粒為模板、用PCR法或酶切法制備。制備時需保證含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段總長度不要超過1kb，同時比DNA shuffling終產(chǎn)物(第二輪PCR產(chǎn)物)長200-400bp。每次DNA Shuffling實驗至少需要2μg起始DNA片段(如果含幾個基因片段，則彼此的比例為1:1)，并且必須通過膠回收的方法回收，以便徹底去除殘留的質(zhì)粒模板、引物和非特異擴(kuò)增產(chǎn)物等。zuì后需用分光光度法準(zhǔn)確定量。
2.提前準(zhǔn)備37℃和75℃水浴，同時新鮮配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必須在用時才配制，方法是將1μl 本試劑盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超純水混合)。此溶液需在24小時內(nèi)使用。
3.在一個離心管中，按順序加入下列成分：

成分	用量
待突變基因片段(第1步制備)	2μg
溶液A	5μl
溶液B	5μL
DNase I工作液(第2步制備)	2μL
超純水	36μL

4.充分輕柔吹打混勻后37℃水浴8分鐘，然后立即放75℃水浴處理10分鐘以滅活DNase I。
5.在2-3%瓊脂糖凝膠上電泳，用常規(guī)的膠回收法回收25-150bp范圍的所有片段待用。注意：一定要加合適的DNA marker以便確定片段范圍，zuì好使用本公司生產(chǎn)的綠如藍(lán)核酸染料(可見光型)作為電泳染料以避免用UV照射DNA，否則UV使DNA發(fā)生的交聯(lián)將大降低后續(xù)擴(kuò)增效果。
6.分光光度法測定回收片段的濃度。
7.在PCR管中按順序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超純水到100μl。
8.按下面的PCR反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行輪無引物PCR：

過程	溫度	時間
PCR前變性	94℃	150s
PCR反應(yīng)(40循環(huán))	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	10s，每次循環(huán)后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

9.取5-10μl進(jìn)行電泳檢測，然后進(jìn)行PCR回收，得到輪PCR產(chǎn)物。
10.將回收的輪PCR產(chǎn)物1μl原液作為模板設(shè)置3管第二輪PCR反應(yīng)。

成分	用量
回收的輪PCR產(chǎn)物	1μL
PCR Mix 3.0，2×	50μL
自備DNA Shuffling引物	各1μM
超純水	加水到100μL

11.按下列PCR參數(shù)進(jìn)行第二輪PCR。

過程	溫度	時間
活化	94℃	150s
PCR反應(yīng)(25次循環(huán))	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	60s，每次循環(huán)后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

12.電泳檢測，回收預(yù)期大小的PCR產(chǎn)物，用于后續(xù)的構(gòu)建克隆文庫實驗(略)。

疑難解答：
Q：易錯PCR和DNA Shuffling有何區(qū)別？
A：前者引入的是點突變，后者引入的是重組突變。示意圖如下：


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WE0137 一步法Real-Time RT-qPCR試劑盒 100次

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