MTS溶液可以直接加入到細胞樣品中，不需要預配各種成分，MTS溶液很穩定，對細胞沒有毒性，可以長時間孵育細胞。MTS法測定細胞增殖或毒性試驗中活細胞數目的靈敏度高，無放射性，檢測細胞增殖實驗的靈敏度比其它方法如MTT, XTT和WST-1高。...

MTS細胞增殖與毒性檢測試劑盒

 

產品編號：HR0489

產品組成：

儲存條件：

2-8℃避光保存。長期不用的分裝后于-20℃避光保存，避免反復凍融。有效期1年。

使用限制：本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

MTS細胞增殖與毒性檢測試劑盒產品簡介：

本產品是應用新型的水溶性甲臢化合物[3-（4，5-二甲基噻唑-2-基）-5-（3-羧甲酯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑（金翁），內鹽；MTS]快速高靈敏度檢測細胞增殖和細胞毒性的比色檢測產品。

MTS被細胞生物還原成一種可溶于組織培養基的甲臢化合物，新陳代謝活躍的活細胞內的脫氫酶類將MTS轉化成液態可溶的甲臢化合物，這種甲臢化合物在490nm的吸收值可以直接在96 孔板上測量，而不需要另外作處理。由490nm測量的吸收值所表示的甲臢產物的數量與培養物中活性細胞的數量成正比。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數量呈線性關系。

MTS溶液可以直接加入到細胞樣品中，不需要預配各種成分，MTS溶液很穩定，對細胞沒有毒性，可以長時間孵育細胞。MTS法測定細胞增殖或毒性試驗中活細胞數目的靈敏度高，無放射性，檢測細胞增殖實驗的靈敏度比其它方法如MTT, XTT和WST-1高。

產品特點：

● 易于使用：直接將MTS溶液，加入到細胞中，孵育然后讀取吸光度值。

● 快速：在96孔板中進行檢測，不需洗滌或收獲細胞。也不需要溶解步驟。因為MTS甲臢產物可溶解在組織培養基中。

● 非放射性：不需液閃混合液，不需處理放射性廢物（不像[3H]-胸腺嘧啶）。

● 靈活：平板被讀數后還可以放回溫箱繼續顏色反應（不像MTT）。

● 安全：不需要揮發性有機溶劑來溶解甲臢化合物（不像MTT）。

應用：

● 細胞增殖；細胞毒性；凋亡結果 ● 化學靈敏性 ● 細胞貼附確定；趨化性

樣本類型：

● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 帶有450nm波長的酶標儀/分光光度計 ● CO₂培養箱 ● 離心機 ● 移液器 ● 96孔培養板

● PBS緩沖液 ● HBSS

MTS細胞增殖與毒性檢測試劑盒使用注意事項：

● 需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

● 用培養基或PBS來配制待檢測藥物。

● 如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有MTS的待測藥物溶液在490nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入MTS,如果吸光度相對較大,則需要除去培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的100μL培養基和10μL MTS進行檢測。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

● 加MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數情況孵育1 小時即可，白細胞需要培養較長時間。

● 如果不是使用96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

活性測定使用方法：

1、收集細胞，加細胞懸液100μL（約5000-10000個細胞）到96孔板（邊緣孔用無菌水或PBS填充）。每板設對照（加100μL培養基）。

2、置37℃，5% CO₂孵育過夜，倒置顯微鏡下觀察。

3、每孔加入10μL待檢測藥物溶液，37℃孵育。

【注】：

● 此處以藥物處理細胞為例，實際以自己的細胞樣品為準。

● 用各種方法制備的細胞模型按下面方法加入MTS試劑后檢測即可。

4、每孔加入10μL MTS 溶液，37℃孵育1-4小時。

【注】：

● 此處以96孔板加樣為例，實際檢測時以自己的細胞培養容器為準。

● 按培養基的用量的10%比例添加MTS試劑即可。

5、測定490nm各孔的吸光值。

6、同時設置空白孔（培養基和MTS溶液，無細胞），對照孔（不加藥培養基和MTS溶液，有細胞），每組設定3-5復孔。

【注】：

● 復孔數量根據自己實際需要設定，為了降低試劑消耗成本，可以少設復孔。

結果分析：

細胞活力計算：

將各測試孔的OD值減去調零孔OD值或對照孔OD值。各重復孔的OD值取平均數。

細胞活力% =（加藥細胞OD-空白OD/對照細胞OD-空白OD）×100

數量測定使用方法：

1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。

2、按比例(例如：1/2 比例)依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。

3、接種后培養2-4小時使細胞貼壁，然后加MTS試劑培養一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數量為橫坐標(X軸)，OD值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量 (使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入MTS后的培養時間)。

常見問題：

● 檢測時需要換液嗎？

如果待測藥物有還原性，需要換液，否則不需要。

● 如何判斷待測藥物是否含有還原性？

測定不含細胞，僅含有待測藥物的溶液加入MTS反應后的在490nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，說明待測藥物沒有還原性或還原性很小，對MTS沒有影響，則可以不換液，在培養基中直接加入MTS；如果吸光度相對較大，說明藥物具有較強的還原性，則需要除去含藥物的培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的100μL培養基和10μL MTS進行檢測。

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