M04細(xì)胞膜染色試劑盒是利M系列熒光探針進(jìn)行細(xì)胞膜特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M04細(xì)胞膜染色探針為綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜探針，具有748/780nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。...

細(xì)胞膜染色試劑盒(深紅色)

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR8573

產(chǎn)品組成：

細(xì)胞膜染色試劑盒(深紅色)儲(chǔ)存條件：

染料-20℃避光保存，稀釋液2-8℃保存，有效期6個(gè)月。

【注】：

● 染料短期2周內(nèi)可以2-8℃保存。染料長(zhǎng)期不用可以-20℃保存。避免反復(fù)凍融。

● 染色液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

M04細(xì)胞膜染色試劑盒是利M系列熒光探針進(jìn)行細(xì)胞膜特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M04細(xì)胞膜染色探針為綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜探針，具有748/780nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。

M系列探針是對(duì)活細(xì)胞的細(xì)胞膜進(jìn)行選擇性染色的一類熒光染料，該系列探針可以選擇性標(biāo)記細(xì)胞膜。當(dāng)親脂性的綠色熒光探針M04進(jìn)入細(xì)胞膜后，在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。染色液M04在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，被激發(fā)后可以發(fā)出紅色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。

熒光探針M04通常不會(huì)明顯影響細(xì)胞的活力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長(zhǎng)期示蹤劑（long-term tracer）。除了最簡(jiǎn)單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測(cè)細(xì)胞的融合和粘附，檢測(cè)發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移，通過FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）檢測(cè)脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散，檢測(cè)細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。

M系列細(xì)胞膜探針具有多種顏色可以選擇，可根據(jù)情況對(duì)樣品進(jìn)行多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。除了本試劑盒的深紅色熒光探針，還可以提供綠色、橙色等顏色的染色試劑盒。

以96孔板每孔200μL染色液計(jì)，本試劑盒小包裝可以染色1000-5000個(gè)樣本。

細(xì)胞膜染色試劑盒(深紅色)檢測(cè)方法：

● 流式細(xì)胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦

樣本類型：

● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 激光共聚焦/熒光顯微鏡 ● PBS緩沖液 ● 或者HBSS(不含酚紅)

 

使用注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

● M04染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。

注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

● 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。

● 染色后立即進(jìn)行分析。

● 本染色液可用于細(xì)胞涂片、細(xì)胞的檢測(cè)。

使用方法：

1、染色工作液的配制：

根據(jù)樣本數(shù)量，用37℃培養(yǎng)箱預(yù)熱染料稀釋液試劑B將M04 熒光染料10倍稀釋。再用HBSS或相應(yīng)的無(wú)血清培養(yǎng)基或其他緩沖液將探針M04進(jìn)行40-200倍稀釋，配制成染色工作液。

【注】：

● 也可以不使用本試劑盒中的試劑B，直接用HBSS等緩沖液或相應(yīng)的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋M04染料至所需濃度。

● 開始實(shí)驗(yàn)前，使用HBSS緩沖液或無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋染料儲(chǔ)存液到需要的工作濃度。工作濃度應(yīng)根據(jù)不同細(xì)胞的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的最佳工作濃度，建議至少在超過10倍范圍的濃度下進(jìn)行測(cè)試。一般染色終濃度為試劑盒中染料母液的400-2000倍稀釋，1000-2000倍適合大多數(shù)細(xì)胞樣本。

● 建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對(duì)母液進(jìn)行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。

● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽(yáng)性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

● 若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，熒光信號(hào)會(huì)衰減。

2、細(xì)胞染色

懸浮細(xì)胞染色

1) 用PBS洗滌細(xì)胞2次。

【注】：

● 500×g離心5分鐘。

2) 加入適量體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度大約為1×10⁶/mL。

3) 在37℃孵育細(xì)胞5～120分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間。

4) 孵育結(jié)束，500×g離心5分鐘。

5) 傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

6) 重復(fù)（4），（5）步驟兩次以上。

貼壁細(xì)胞染色

1) 用PBS洗滌細(xì)胞2 次。

2) 細(xì)胞培養(yǎng)板中或細(xì)胞爬片上加入適量體積的染色工作液。

【注】：

● 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入100μL染色液即可。

3) 37℃孵育細(xì)胞5～120分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間。

4) 吸干染色工作液，用培養(yǎng)液洗培養(yǎng)板或蓋玻片2～3次，每次用預(yù)熱的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

3、用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)

激發(fā)波長(zhǎng)為748nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為780nm。

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