土壤蛋白提取試劑盒適用于從各種紅壤、棕壤、褐土、黑土、栗鈣土、漠土、鹽堿土、巖性土和高山土等中提取土壤中總蛋白。提取過程簡單方便，可在1 小時內完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。...

土壤蛋白提取試劑盒

 

產品編號：HR0073

產品組成：

土壤蛋白提取試劑盒儲存條件：

蛋白酶抑制劑-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

產品簡介：

土壤蛋白提取試劑盒適用于從各種紅壤、棕壤、褐土、黑土、栗鈣土、漠土、鹽堿土、巖性土和高山土等中提取土壤中總蛋白。提取過程簡單方便，可在1 小時內完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒（相關產品HR0165）。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關產品HR0389）。

產品特點：

● 使用方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

土壤蛋白提取試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

1、提取液制備：

每1mL冷的蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、土壤經干燥過篩，除去植物根系等雜質，置于研缽中研磨成細小均勻顆粒。

3、每0.5g-2g研磨后的土壤中加入1mL冷的土壤蛋白提取液（提取液體積約土壤體積的3倍左右），置于渦旋混合儀上振蕩1分鐘, 使其充分混合均勻，混勻后，于搖床中在4℃條件下振蕩15-20分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘渦旋混勻即可。

4、在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到土壤總蛋白。

6、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

● 不同來源的土壤樣本中蛋白含量差異極大。

● 大部分土壤樣本最后得到的蛋白濃度較低，如果不方便進行下游實驗，可以用透析袋進行濃縮或者用蛋白濃縮柱（相關產品HR0388）離心濃縮。

常見問題分析：

● 蛋白濃度低？

處理部分樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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