植物線粒體提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗(yàn)，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要植物線粒體提取試劑盒等亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)研究產(chǎn)品的客戶，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括植物線粒體提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：植物線粒體提取試劑盒
英文名稱：Plant Mitochondrion Extraction Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：XH005
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T

本試劑盒可用于從植物葉片組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于田間采摘或者實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的植物葉片中線粒體的制備。其制備物，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。但不適用于進(jìn)一步DNA提取。

試劑盒組成：

組份	50T	100T
Lysis Buffer	100mL	200mL
β-巰基乙醇	1mL	1mL
Mito-Wash Buffer	25mL	50mL
Store Buffer	5mL	10mL

保存條件：4℃可保存3個(gè)月，長期保存可置-20℃。

操作步驟：
1．樣本采集前處理：無論田間自然生長還是實(shí)驗(yàn)室組織培養(yǎng)，采摘前須避光生長24-48小時(shí)，以減少葉片組織中糖類及葉綠體含量。取適量Lysis Buffer，加入0.5% β-巰基乙醇，10ml Lysis Buffer加入50μlβ-巰基乙醇，混勻，形成Lysis Buffer/β-巰基乙醇溶液，此溶液可2～8度保存一個(gè)月。
2．葉片用蒸餾水清洗2-3次，濾紙吸干，有條件請(qǐng)用液氮研磨葉片1-2克，研磨完后，取800mg左右研磨的葉片粉，加入1.5ml預(yù)冷的Lysis Buffer/β-巰基乙醇溶液，混勻。如果無條件（無液氮），請(qǐng)預(yù)冷研缽，取洗過的葉片1000mg，用剪刀剪為碎塊放入玻璃勻漿器或者研缽中。加入1.5ml預(yù)冷的Lysis Buffer/β-巰基乙醇溶液，冰上研磨至看不見明顯組織塊；
3．將研磨物放置合適的離心管，4℃，1000×g離心5min；
4．將上清轉(zhuǎn)移到一新的離心管中，在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巰基乙醇溶液，混勻，再次4℃，1000×g離心5min，取上清；合并兩次上清，將上清4℃ 1000×g再次離心5min。
5．取上清，加入一新的離心管中，4℃，16,000×g離心10min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底。
6．在線粒體沉淀中加入0.5mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀，4℃，1000×g離心5min；
7．取上清，加入一新的離心管中，4℃，16,000×g離心10min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底；
8．用50 -100μL Store Buffer或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項(xiàng)：
1．以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此計(jì)算離心速度。
2．進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接在第7步的沉淀中加入上樣緩沖液裂解線粒體。
3．β-巰基乙醇有毒，請(qǐng)注意通風(fēng)及防護(hù)。

一般低溫度心機(jī)都有離心力顯示，如果沒有，可以用以下公式簡單的換算。
  G＝1.11×(10^-5)×R×[rpm]²
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；[rpm]²即：轉(zhuǎn)速的平方；R為半徑，單位為厘米。

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