JN0042 2×Ultra Taq Plus

產品簡介
我公司致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白,包括2×Ultra Taq Plus在內的各類受體、細胞因子、生長因子、轉錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...
產品詳細介紹
特別提示:包括2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix
產品貨號:JN0042
產品規格:0.5ml×5
本制品是將PCR反應所需的UltraTaq Plus DNA聚合酶、dNTP、MgCl2、反應緩沖液以及優化劑以及穩定劑,預先配制成2倍濃度的混合物。使用時只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進行PCR反應,使用非常方便,并減少了產生污染的機會。
2×UltraTaq Plus PCR MasterMix專為基因組DNA等復雜模板快速PCR擴增檢測設計優化,具有擴增快速、高靈敏度、抗干擾能力強等,并具有一定的保真特性,能部分糾正DNA擴增過程中所出現的錯誤。與2×UltraTaq DNA PCR MasterMix相比,具有擴增長度增加(簡單模板 擴增長度可達30kb,復雜模板可有效擴增10kb), 保真度好的特點;與 2×Fast Pfu DNA PCR MasterMix相比,具有擴增速度更快,擴增靈敏度更高的優點。
使用本制品擴增得到的PCR產物具有3′端"A"突出,可直接克隆于 T-vector中。
產品用途:
1、可替代大部分UltraTaq DNA聚合酶的用途;
2、需高靈敏度的PCR擴增;
3、大片段PCR擴增反應 (可達30kb)。
常用反應體系(50μl):
| 組分 | 體積 |
| 2×PCR MasterMix* | 25μl |
| 上游引物 | 0.2-1.0μM(終濃度) |
| 下游引物 | 0.2-1.0μM(終濃度) |
| dNTP(各10mM) | 1.0μl |
| 模板 | 1-50ng(質粒) |
| 10ng-1μg(基因組) | |
| ddH2O | 至50μl |
| *Mg2+終濃度為2mM | |
常用PCR循環:
| 當擴增片段<3K: | |
| 94℃ | 1分鐘30秒 |
| 30次循環 |
94℃,30秒 57℃,30秒 72℃ 根據產物長度調整,15秒/kb |
| 72℃ | 3分鐘 |
| 4℃ | 保溫 |
| 當擴增片段≥3K(推薦引物長度≥30bp): | |
| 94℃ | 1分鐘30秒 |
| 30次循環 |
94℃,5秒 68℃ 根據產物長度調整,15秒/kb |
| 72℃ | 3分鐘 |
| 4℃ | 保溫 |
PCR MasterMix選購指南:
| 編號 | 產品名稱 | 特點 |
| 適用于菌落鑒定、菌液鑒定及常規PCR鑒定實驗的Mix系列 | ||
| JN0030 | 2×Taq PCR MasterMix | 高PCR Mix,使用簡便,擴增靈敏度高 |
| JN0034 | 2×Complex Taq PCR MasterMix | JN0030改進版,性能更均衡,適用面更廣 |
| JN0040 | 2×Fast Taq PCR MasterMix | zuì快速的PCR試劑,常規PCR鑒定45分鐘內知道結果 |
| JN0035 | 2×RoomTop Taq PCR MasterMix | 可放在手邊的PCR試劑,室溫穩定存放60天 |
| JN0036 | 2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix | 室溫穩定存放60天,高速PCR試劑,常規PCR鑒定45分鐘內知道結果 |
| 適用于一些較難擴增的PCR條帶的鑒定及短片段克隆 | ||
| JN0032 | 2×Taq Plus PCR MasterMix | 擴增效率更高及較好的保真度 |
| JN0038 | 2×Hot Start Taq PCR MasterMix | 采用熱啟動Taq,可獲得很好的特異性 |
| JN0041 | 2×Ultra Taq PCR MasterMix | 高速擴增酶,優化配方,解決PCR擴增難題的,靈敏度高 |
| 高保真酶試劑,適用于長片段基因克隆 | ||
| JN0031 | 2×Pfu PCR MasterMix | 采用高保真酶,適用于基因克隆 |
| JN0043 | 2×Fast Pfu PCR MasterMix | 采用改良型高保真酶,更好的擴增效果,4倍擴增速度;擴增迅速 |
| 防止PCR產物二次污染、高檢測靈敏度的PCR試劑 | ||
| JN0047 | 2×PCR MasterMix(防污染) | 采用dUTP/UDG酶系統,從根本上杜PCR產物二次污染 |
| JN0033 | 2×Genotyping PCR Kit(nomal) | 高檢測靈敏度,可達到普通PCR試劑102至104倍擴增靈敏度 |
PCR MasterMix性能對比表:
| 名稱 | 編號 | 擴增時間 | 擴增長度 | 是否有3"-A | 基因組擴增 |
| 2×Taq PCR MasterMix | JN0030 | 1min/kb | ≤8kb | √ | + |
| 2×RoomTop Taq PCR MasterMix | JN0035 | 1min/kb | ≤8kb | √ | ++ |
| 2×Complex Taq PCR MasterMix | JN0034 | 1min/kb | ≤8kb | √ | + |
| 2×Fast Taq PCR MasterMix | JN0040 | 15s/kb | ≤8kb | √ | + |
| 2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix | JN0036 | 15s/kb | ≤8kb | √ | ++ |
| 2×Ultra Taq PCR MasterMix | JN0041 | 15s/kb | ≤8kb | √ | +++ |
| 2×Taq Plus PCR MasterMix | JN0032 | 1min/kb | ≤20kb | √ | ++++ |
| 2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix | JN0042 | 15s/kb | ≤30kb | √ | ++++ |
| 2×Hot Start Taq PCR MasterMix | JN0038 | 1min/kb | ≤8kb | √ | ++++ |
| 2×Hot Start Taq Plus PCR MasterMix | JN0039 | 1min/kb | ≤20kb | √ | ++++ |
| 2×Pfu PCR MasterMix | JN0031 | 1min/kb | ≤6kb | × | + |
| 2×Fast Pfu PCR MasterMix | JN0043 | 30min/kb | ≤12kb | × | + |
| 2×SYBR Green Realtime PCR MasterMix | JN0049 | 1min/kb | ≤8kb | √ | ++ |
| 2×Genotyping PCR Kit(Normal) | JN0033 | 1min/kb | ≤8kb | √ | +++++ |
| 2×Genotyping PCR Kit(Fast) | JN0044 | 15s/kb | ≤8kb | √ | +++++ |
| 2×PCR MasterMix(防污染) | JN0047 | 1min/kb | ≤8kb | √ | + |
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名稱:6nt隨機引物(0.5 ug/uL)
貨號:BTN100409
規格:5μg
本產品為長度為6nt的隨機引物,序列為5′-(NNNNNN)-3′,主要用于以任何RNA為模板合成cDNA,也可以用于DNA探針的隨機引物標計。
儲存條件:低溫運輸和-20℃保存,有效期一年。
疑難解答:
Q:在合成cDNA時,使用Oligo dT12-18和用隨機引物有何區別?
A:只有當以帶polyA尾巴的RNA作為模板才能使用Oligo dT作為引物,而任何RNA模板都可以使用隨機引物。使用后者的序列覆蓋率比使用Oligo dT更高。
名稱:核酸稀釋液,測OD專用
貨號:BTN131179
規格:250mL
測定核酸的OD需要一定的pH和鹽濃度,本產品就是根據這一特點開發的、專門用于溶解和稀釋核酸樣品的溶液。
儲存條件:常溫運輸和保存,有效期一年。
名稱:PCR試劑盒(含Taq酶,Buffer,dNTP,上樣液)
貨號:YT379
規格:400次|2000次
本PCR試劑盒帶有Taq DNA Polymerase(YT371)、PCR buffer、dNTP和上樣緩沖液,自備模板和引物即可進行PCR反應,適合用于普通的PCR或RT-PCR定性或定量檢測,也可以用于不太長的的DNA片段的克隆。本試劑盒用于50微升的PCR反應體系,足夠用于160個反應,用于20微升的PCR反應體系,足夠用于400個反應。
產品組份:
Taq DNA Polymerase(5U/μl)————200U
10×PCR Buffer(with Mg2+)————1ml
dNTP(2.5mM each)—————————0.7ml
6×DNA Loading Buffer——————1ml
儲存條件:-20℃。
名稱:Bes Taq DNA Polymerase
貨號:WE0103
規格:500U|2500U
Bes Taq DNA Polymerase具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切核酸酶活性。在普通的PCR條件下,與Taq DNA Polymerase相比,具有擴增效率高、錯配率低的優良性能,兼具有Taq DNA Polymerase的高擴增效率和Pfu DNA Polymerase的高保真性。使用本品擴增得到的PCR產物3"端附有一個“A”堿基,因此可直接用于T/A克隆。本產品適用于常規的PCR反應和對保真性有要求的基因克隆等反應。
產品組成:
| 組份 | 500 U | 2500U |
| Bes Taq DNA Polymerase, 5 U/μl | 100μl | 5×100μl |
| 10×PCR Buffer | 1.8ml | 5×1.8ml |
活性定義:
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在74℃,30分鐘內,將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸性不溶物質所需的酶量定義為1個活性單位(U)。
質量控制:
1、經過多次柱純化,SDS-PAGE檢測其純度大于99%;
2、經檢測無外源核酸酶活性;
3、PCR方法檢測無宿主殘余DNA;
4、能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因;
5、室溫存放一個月,無明顯活性改變。
使用方法:
以下舉例為以人基因組DNA為模板,擴增1 kb的片段的PCR反應體系和反應條件,實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的改進和優化。
1、PCR反應體系
| 試劑 | 50μl反應體系 | 終濃度 |
| 10×PCR Buffer | 5μl | 1× |
| dNTP Mix,10 mM each | 1μl | 200μM each |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| Bes Taq DNA Polymerase,5 U/μl | 0.25-0.5μl | 1.25-2.5U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:引物濃度請以終濃度0.1-1.0μM作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下,可提高引物的濃度;發生非特異性反應時,可降低引物濃度,由此優化反應體系。
2、PCR反應條件
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
| 預變性 | 94℃ | 2min | |
| 變性 | 94℃ | 30s | 25-35個循環 |
| 退火 | 55-65℃ | 30s | |
| 延伸 | 72℃ | 30s | |
| 終延伸 | 72℃ | 2min |
注意:
1)一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃,無法得到理想的擴增效率時,適當降低退火溫度;發生非特異性反應時,提高退火溫度,由此優化反應條件。
2)延伸時間應根據所擴增片段大小設定,本產品Bes Taq DNA Polymerase的擴增效率為2 kb/min。
3)可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,錯配機率會增加,非特異性背景嚴重。所以在保證產物得率的前提下應盡量減少循環次數。
儲存條件:-20℃,避免反復凍融。
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